大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)属于鲽形目(Pleuronectiformes)、鲆科(Bothidae)、菱鲆属(Scophthalmus)，俗称“多宝鱼”，为原产于大西洋东岸的冷水性经济海水鱼类(马爱军等，2003)。自1992年引进我国后，由于其适应低水温生活、生长迅速、经济价值高、易于集约化养殖等特点(Bromley，1980)，大菱鲆的工厂化养殖已经成为北方海水养殖业的支柱产业。

鱼粉需求量上升，价格不断上涨，依靠鱼粉为主要饲料蛋白源已经难以满足水产养殖业的发展要求。用价格低廉的植物蛋白替代部分鱼粉是解决目前鱼粉短缺问题的一种有效措施，但由于植物蛋白含有抗营养因子、氨基酸不平衡等，限制了其在水产饲料中的添加量(周歧存等，2005; Bureau et al，1998; Francis et al，2001; Gomes et al，1995; 陈伟等，2009¹⁾; El-Saidy et al，2003; Kaushik et al，1998; 庄平等，2002)。

1) 陈伟. 抗营养因子对牙鲆(Paralichthys olivaceus olivaceus)利用大豆蛋白源的影响. 中国海洋大学博士研究生学位论文, 2009

水解鱼蛋白(Fish protein hydrolysate，FPH)是鱼蛋白在酸、碱或酶的条件下水解获得的一种含有不同长度的多肽片段和少量游离氨基酸的蛋白制品(Liaset et al，2008; 王新星等，2011)。FPH已作为一种新型的优质蛋白源用于水产饲料(王长云等，1995; Liaset et al，2000; Kotzamanis et al，2007; Zheng et al，2013)。经过超滤获得的FPH分子量较小，低分子FPH在鱼类饲料中的效果要优于高分子FPH(郑珂珂等，2011; Bui et al，2014)。Aksnes等(2006a)研究发现，低分子FPH是维持虹鳟(Oncorhynchus mykiss)在饲喂高植物蛋白饲料条件下正常生物功能必不可少的成分。许团辉等(2012)在研究不同水平低分子FPH对牙鲆(Paralichthys olivaceus)的影响时发现，特定生长率、摄食率、饲料效率等随着FPH添加量的增加呈先上升后下降的趋势。然而，关于大菱鲆高植物蛋白饲料中低分子FPH的适宜添加水平的研究尚未报道。

本研究的目的是在含有高植物蛋白源的大菱鲆幼鱼饲料中添加不同水平的低分子FPH替代鱼粉，探讨其对大菱鲆幼鱼生长存活状况、鱼体组成及肝脏中类胰岛素生长因子I受体(Insulin-like growth factor receptor，IGF-IR)基因表达量的影响，并以此评价低分子FPH替代鱼粉的效果，筛选合适的FPH替代水平，为肉食性鱼类科学利用FPH及提高植物蛋白源的利用效率提供一定的理论依据。

水解鱼蛋白的实验用鱼为去头和内脏的太平洋狭鳕鱼(Theragra chalcogramma)，水解鱼蛋白的制备参考Zheng等(2012)的方法。

利用高效液相色谱仪测定水解蛋白的分子量，依据Zheng等(2012)的方法，测得低分子水解鱼蛋白的分子量分布见表 1。

表 1(Tab. 1)

表 1 水解鱼蛋白的分子量分布 Table 1 Distribution of molecular weight of FPH 分子量 Molecular weight(Da) 水解鱼蛋白 Fish protein hydrolysate(%) 10000-5000 0.20 5000-2000 1.14 2000-1000 5.21 1000-500 21.34 200-500 56.64 100-200 3.66 <100 11.82

表 1 水解鱼蛋白的分子量分布 Table 1 Distribution of molecular weight of FPH

本实验以鱼粉、植物蛋白(豆粕、玉米蛋白粉、谷朊粉)及水解鱼蛋白为蛋白源，以鱼油为脂肪源，制作成4种等氮等能的饲料(表 2)：无添加FPH组为对照组(UF-0)，FPH替代总蛋白的5%、10%、20%分别为UF-5、UF-10、UF-20组。所有原料粉碎过80目筛，按照饲料配方(表 2)将原料混合，制成粒径为3 mm的饲料，用烘箱在55℃下烘12 h至恒重，置于-20℃冰箱保存备用。饲料氨基酸组成见表 3。

表 2(Tab. 2)

表 2 实验饲料配方和营养组成 Table 2 Formulation and proximate chemical composition of the experimental diets(%) 原料Ingredients(%) UF-0 UF-5 UF-10 UF-20 鱼粉Fish meal 15.00 11.50 8.00 1.00 豆粕Soybean meal 24.00 24.00 24.00 24.00 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 12.00 12.00 12.00 12.00 谷朊粉Wheat gluten 18.00 18.00 18.00 18.00 水解鱼蛋白FPH 0 3.10 6.20 12.40 小麦粉Wheat meal 12.30 12.50 12.60 12.90 鱼油Fish oil 8.70 8.90 9.20 9.70 卵磷脂Soybean lecithin 1.00 1.00 1.00 1.00 维生素混合物 Vitamin premix1 1.50 1.50 1.50 1.50 矿物质混合物 Mineral premix2 1.50 1.50 1.50 1.50 氯化胆碱Choline chloride 2.00 2.00 2.00 2.00 磷酸二氢钙CaH2PO4 2.00 2.00 2.00 2.00 维生素C Vitamin C 0.50 0.50 0.50 0.50 L-赖氨酸L-lysine 0.80 0.80 0.80 0.80 D/L-蛋氨酸D/L-methionine 0.40 0.40 0.40 0.40 L-精氨酸L-arginine 0.30 0.30 0.30 0.30 营养组成 Proximate composition(%) 粗蛋白Crude protein 51.81 52.42 52.24 52.16 粗脂肪Crude lipid 10.56 10.71 10.75 10.78 灰分Ash 7.24 7.06 7.00 6.83 注：1. 维生素混合料(mg/kg or g/kg饲料)：硫胺素，25 mg；核黄素，45 mg；盐酸吡哆醇，20 mg；维生素B12，0.1 mg；维生素K3，10 mg；肌醇，800 mg；泛酸，60 mg；烟酸，200 mg；叶酸，20 mg；生物素，1.20 mg；维生素A，32 mg；维生素D，5 mg；维生素E，120 mg；次粉18.67 g 2. 矿物质混合料(mg/kg or g/kg 饲料)：氟化钠，2 mg；碘化钾，0.8 mg；氯化钴，50 mg；硫酸铜，10 mg；硫酸铁，80 mg；硫酸锌，50 mg；硫酸镁，1200 mg；磷酸二氢钙，3000 mg；氯化纳，100 mg；沸石粉，15.51 g Note: 1. Vitamin premix(mg/kg or g/kg diet): thiamine 25 mg，riboflavin 45 mg，pyridoxine 20 mg，vitamin B12 0.1 mg，menadione 10 mg，inositol 800 mg，pantothenate 60 mg，tocopherol acetate 200 mg，folic acid 20 mg，biotin 1.20 mg，vitamin A 32 mg，vitamin D 5 mg，vitamin E 120 mg，wheat flour 18.67 g 2. Mineral premix(mg/kg or g/kg)diet: NaF 2 mg; KI 0.8 mg; CoCl2·6H2O 50 mg; CuSO4·5H2O 10 mg; FeSO4·7H2O 80 mg; ZnSO4·7H2O 50 mg; MnSO4·4H2O 1200 mg; Ca(H2PO4)2· H2O 3000 mg; NaCl 100 mg; Mordenzeo 15.51 g

表 2 实验饲料配方和营养组成 Table 2 Formulation and proximate chemical composition of the experimental diets(%)

表 3(Tab. 3)

表 3 饲料氨基酸含量分析(饲料干物质%) Table 3 Amino acid composition of the experimental diets(Dry matter%) 氨基酸Amino acid(%) UF-0 UF-5 UF-10 UF-20 天冬氨酸Asp 2.86 2.58 2.47 2.77 苏氨酸Thr 1.43 1.34 1.28 1.36 丝氨酸Ser 1.92 1.78 1.75 1.86 谷氨酸Glu 10.54 9.61 9.59 10.38 甘氨酸Gly 1.67 1.58 1.54 1.65 丙氨酸Ala 2.07 1.98 1.93 2.06 半胱氨酸Cys 0.53 0.58 0.49 0.55 缬氨酸Val 1.81 1.74 1.63 1.75 蛋氨酸Met 0.89 0.62 0.84 0.92 异亮氨酸Ile 1.61 1.61 1.50 1.60 亮氨酸Leu 3.56 3.50 3.38 3.59 酪氨酸Tyr 1.58 1.47 1.33 1.43 苯丙氨酸Phe 2.72 3.06 3.72 3.42 赖氨酸Lys 2.31 2.45 2.32 2.38 组氨酸His 1.02 1.06 0.96 0.89 精氨酸Arg 1.93 2.24 1.88 1.90 牛磺酸Tau 0.14 0.15 0.15 0.16 总氨基酸TAA 38.59 37.35 36.76 38.67 必需氨基酸EAA 17.28 17.62 17.51 17.81 非必需氨基酸NEAA 21.31 19.73 19.25 20.86 EAA/TAA 44.78 47.18 47.67 46.06 EAA/NEAA 81.09 89.31 90.96 85.38

表 3 饲料氨基酸含量分析(饲料干物质%) Table 3 Amino acid composition of the experimental diets(Dry matter%)

实验鱼选用初始体重为(4.16±0.01)g的大菱鲆幼鱼，养殖基地在烟台开发区天源水产有限公司。将鱼苗暂养14 d使其适应养殖环境。采用自然采光，养殖于水体体积为120 L的玻璃钢桶内。养殖用水为深井海水，采用流水养殖模式，流速为5 L/min，连续充气，水温为(14.0±0.5)℃，溶氧高于7 mg/L，盐度为30.0±0.5，pH为7.5-8.0。生长实验开始时，停食 24 h，选择大小均匀、体格健壮且体表无病的大菱鲆幼鱼，称重后随机分配在16个玻璃钢桶内(1个对照组，3个实验组)，每桶25尾鱼，每天用实验饲料饱食投喂两次(06:30和16:30)，投喂结束30 min后，对残饵进行统计，根据100粒饲料的平均重量计算残饵的重量。养殖周期为84 d。

实验开始时，随机取10尾鱼麻醉处理后，保存于-20℃以供后续的鱼体成分分析实验。实验结束时，停食24 h，每桶鱼称重，随机取5尾鱼，保存于-20℃用于鱼体成分分析；每桶取两尾鱼的肌肉，保存于-20℃；每桶取1尾鱼，取同一位置的肝脏保存于RNAwait保存液(Slarbio)中。

饲料和鱼体样品在105℃烘干至恒重，通过失重法测定干物质含量，然后进行生化测定。粗蛋白采用凯氏定氮法；粗脂肪采用索氏抽提法；灰分的测定需先在电炉上炭化后再在马福炉中550℃燃烧3 h，失重法测定。使用日立L-8900型氨基酸分析仪测定饲料和鱼体肌肉氨基酸组成。

利用RNA Extraction Kit(TaKaRa)试剂盒从实验鱼的肝脏中提取总RNA，利用微量核酸测定仪(Nanodrop ND2000)检测RNA的浓度和纯度，使用1%的琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量；-80℃保存。

以提取的肝脏总RNA为模板，根据PrimeScript^TMRT Reagent Kit(TaKaRa)反转录试剂盒的操作说明合成cDNA，利用微量核酸测定仪(Nanodrop ND2000)检测cDNA的浓度；-20℃保存。

本实验采用的是荧光定量的相对定量2^-△△Ct法，选用β-actin管家基因，目的基因IGF-IR的引物根据GenBank中大菱鲆IGF-IR(AJ224993.1)基因序列设计，两种引物由上海生工生物工程股份有限公司合成(表 4)。

表 4(Tab. 4)

表 4 RT-PCR实验用到的引物 Table 4 Real-time PCR primers used in the experiment 基因 Gene 引物序列 Primer sequence(5-3) 引物长度 Length(bp) β-actin F:CCAAAGCCACACGGGAGAA R:AGAGGCATACAGGGACAGCACA 19 22 IGF-IR F:CGTGGACAAATGCTGTGGAT R:CCAGAAGGCAGATGAAGAGG 20 20 1μl，ddH2O 3 μl补充至总体积。反应程序为：95℃ 30 s；95℃ 5 s，60℃ 34 s，40个循环；95℃ 15 s，60℃ 1 min，95℃ 15 s。采用2-DDCt法计算IGF-IR基因的相对表达量，DDCt=(Ct目的基因-Ct管家基因)实验组-(Ct目的基因-Ct管家基因)对照组。

表 4 RT-PCR实验用到的引物 Table 4 Real-time PCR primers used in the experiment

采用SYBR Green I染料法，荧光定量试剂由TaKaRa公司提供；在荧光定量仪(Applied Biosystem 7500 Real-Time PCR System)上进行扩增和数据分析。反应体系为10 μl：SYBR^® Premix Ex Taq^TMⅡ(×2)5 μl，ROX Reference Dye Ⅱ(×50)× 3 0.2 μl，上下游引物各0.4 μl(10 μmol/L)，模板cDNA

增重率(%)=100×(终末体重-初始体重)/初始体重

特定生长率(%/d)=100×[ln(终末体重)-ln(初始体重)]/实验天数

摄食率(%体重/d)=100×总干物质摄食量/[实验天数×(初始体重+终末体重)/2]

饲料效率=鱼体增重(湿重)/总干物质摄食量

蛋白质效率=(终末体重-初始体重)/蛋白摄入量

蛋白质沉积率(%)=100×鱼体蛋白质贮存量/蛋白摄入量

采用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA)，当差异达到显著水平(P<0.05)，进行邓肯多重比较(Duncan’s multiple range tests)，数据表示为平均值±标准差(Mean±SD)。

不同水平低分子FPH对大菱鲆生长性能的影响如表 5所示。经过84 d的饲喂，4个组的大菱鲆幼鱼的成活率在98%以上，且成活率在各组之间无显著差异(P>0.05)。高植物蛋白饲料组UF-5的增重率、特定生长率高于UF-0、UF-10组，但差异不显著(P>0.05)，3组显著高于UF-20组(P<0.05)。UF-5组的饲料效率、蛋白质效率和蛋白质沉积率与UF-0组无显著差异(P>0.05)，但显著高于UF-10和UF-20组(P<0.05)。UF-10组的饲料效率、蛋白质效率和蛋白质沉积率显著高于UF-20组(P<0.05)。摄食率随着FPH添加量的增加有上升趋势，且UF-20组显著高于其他3组(P<0.05)。

表 5(Tab. 5)

表 5 不同水平低分子FPH对大菱鲆幼鱼生长性能的影响(平均值±标准差) Table 5 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on the growth performance of juvenile turbot(Mean±SD) 组别 Group 鱼体增重率 Weight gain rate(%) 特定生长率 Specific growth rate(%/d) 摄食率 Feeding rate(%/d) 饲料效率 Feed efficiency 蛋白质效率 Protein efficiency ratio 蛋白沉积率 Protein deposition rate(%) UF-0 630.92±44.02a 2.37±0.07a 1.29±0.02c 1.38±0.03a 2.37±0.06a 35.02±0.72a UF-5 642.04±37.65a 2.38±0.06a 1.31±0.05c 1.41±0.07a 2.43±0.13a 35.51±1.74a UF-10 578.29±109.81a 2.27±0.18a 1.36±0.03b 1.29±0.08b 2.22±0.14b 32.77±1.97b UF-20 428.20±15.49b 1.98±0.02b 1.45±0.02a 1.12±0.01c 1.92±0.03c 26.89±1.00c 注：同列数据中相同上标字母表示差异不显著(P>0.05) Note: Values in the same column with same superscripts are not significantly different(P>0.05)

表 5 不同水平低分子FPH对大菱鲆幼鱼生长性能的影响(平均值±标准差) Table 5 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on the growth performance of juvenile turbot(Mean±SD)

高植物蛋白饲料中添加不同水平水解鱼蛋白对鱼体化学组成的影响见表 6。对照组UF-0与UF-5、UF-10组的鱼体水分、粗蛋白和粗脂肪含量无显著差异(P>0.05)，但UF-5组与UF-10组鱼体粗蛋白含量及粗脂肪含量高于对照组，且二者之间无显著差异(P>0.05)。FPH高添加组UF-20的水分含量最高，蛋白和脂肪含量最低。UF-0组的灰分含量最高，与其他3组差异显著(P<0.05)。

表 6(Tab. 6)

表 6 不同水平低分子FPH对大菱鲆鱼体化学组成的影响(平均值±标准差) Table 6 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on the body chemical compositions of juvenile turbot(Mean±SD) 组别Group 水分Moisture(%) 粗蛋白Crude protein(%) 粗脂肪Crude lipid(%) 灰分Ash(%) UF-0 76.93±0.42b 14.64±0.20a 3.99±0.20ab 3.40±0.10a UF-5 76.87±0.35b 14.74±0.02a 4.31±0.22a 3.13±0.24b UF-10 76.88±0.39b 14.75±0.11a 4.53±0.37a 3.15±0.10b UF-20 78.94±0.69a 14.12±0.30b 3.64±0.67b 3.05±0.10b 注：同列数据中相同上标字母表示差异不显著(P>0.05) Note: Values in the same column with same superscripts are not significantly different(P>0.05)

表 6 不同水平低分子FPH对大菱鲆鱼体化学组成的影响(平均值±标准差) Table 6 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on the body chemical compositions of juvenile turbot(Mean±SD)

4组实验的鱼体肌肉氨基酸含量组成中(表 7)，UF-5组肌肉中的缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸和亮氨酸4种必需氨基酸含量显著高于UF-0、UF-20组(P<0.05)，与UF-10组无显著差异。UF-5组的苯丙氨酸、赖氨酸和组氨酸3种必需氨基酸含量显著高于其他3组(P<0.05)，其他3组之间无显著差异(P>0.05)。UF-5组必需氨基酸含量及必需氨基酸与非必需氨基酸比值最高，且显著高于其他3组(P<0.05)，UF-0、UF-10和UF-20三组间无显著差异(P>0.05)。

表 7(Tab. 7)

表 7 不同水平低分子FPH对大菱鲆鱼体肌肉氨基酸组成的影响(%)(平均值±标准差) Table 7 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on the amino acid composition of fish muscle in juvenile turbot(%)(Mean±SD) 氨基酸Amino acid(%) UF-0 UF-5 UF-10 UF-20 天冬氨酸Asp 8.54±0.12a 7.07±0.03b 8.73±0.15a 8.52±0.14a 苏氨酸Thr 3.78±0.09a 3.44±0.13b 3.88±0.05a 3.79±0.06a 丝氨酸Ser 3.39±0.08a 2.96±0.15b 3.45±0.02a 3.42±0.08a 谷氨酸Glu 13.78±0.20a 12.94±0.64b 14.17±0.19b 13.42±0.11b 甘氨酸Gly 4.03±0.04a 3.66±0.24c 3.81±0.07b 3.72±0.04b 丙氨酸Ala 5.20±0.13ab 4.97±0.22b 5.25±0.03a 5.12±0.11ab 半胱氨酸Cys 0.79±0.04c 1.78±0.21a 1.00±0.15bc 1.09±0.12b 缬氨酸Val 3.79±0.17b 4.18±0.18a 3.88±0.12ab 3.91±0.12ab 蛋氨酸Met 2.31±0.04b 2.56±0.07a 2.31±0.03b 2.18±0.11b 异亮氨酸Ile 3.69±0.02b 3.91±0.14a 3.80±0.07ab 3.68±0.08b 亮氨酸Leu 6.45±0.09b 6.72±0.26a 6.63±0.11a 6.49±0.13b 酪氨酸Tyr 2.82±0.03ab 2.91±0.07a 2.74±0.03b 2.79±0.08b 苯丙氨酸Phe 3.57±0.07b 6.83±0.58a 3.55±0.05b 3.64±0.18b 赖氨酸Lys 7.68±0.10b 8.42±0.32a 7.79±0.14b 7.83±0.07b 组氨酸His 1.70±0.02b 1.93±0.02a 1.72±0.02b 1.70±0.02b 精氨酸Arg 5.00±0.07 5.02±0.12 4.99±0.09 4.84±0.13 牛磺酸Tau 0.12±0.01b 0.15±0.02b 0.12±0.02b 0.20±0.04a 总氨基酸TAA 76.63±1.04b 79.45±1.23a 77.82±0.78ab 76.37±0.63b 必需氨基酸EAA 37.97±0.50b 43.01±0.37a 38.55±0.33b 38.09±0.56b 非必需氨基酸NEAA 43.01±0.57a 36.43±0.95b 39.28±0.51a 38.29±0.10a EAA/TAA 49.55±0.15b 54.14±0.53a 49.53±0.24b 49.87±0.33b EAA/NEAA 98.22±0.60b 118.09±2.53a 98.14±0.93b 99.47±1.29b 注：同列数据中相同上标字母表示差异不显著(P>0.05) Note: Values in the same column with same superscripts are not significantly different(P>0.05)

表 7 不同水平低分子FPH对大菱鲆鱼体肌肉氨基酸组成的影响(%)(平均值±标准差) Table 7 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on the amino acid composition of fish muscle in juvenile turbot(%)(Mean±SD)

本实验采取相对定量的2^-△△Ct法对IGF-IR基因在对照组UF-0和实验组UF-5、UF-10、UF-20的表达量进行相对定量，UF-0组的表达量设定为1(表 8)。从表 8中可以看出，肝脏中IGF-IR基因的表达水平随着水解鱼蛋白添加水平的升高而上升，且UF-20组表达量显著高于其他3组(P<0.05)，UF-10组显著高于UF-0组(P<0.05)，UF-5组与UF-0、UF-10组差异不显著(P>0.05)。

表 8(Tab. 8)

表 8 不同水平低分子FPH对大菱鲆幼鱼肝脏中 IGF-IR基因mRNA表达量的影响(平均值±标准差) Table 8 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on mRNA expression of IGF-IR gene in liver of juvenile turbot(Mean ± SD) 组别 Group IGF-IR基因mRNA相对表达量 mRNA relative expression of IGF-IR gene UF-0 1.00±0.00c UF-5 1.12±0.20bc UF-10 1.37±0.22b UF-20 1.90±0.39a 注：数据中相同上标字母表示差异不显著(P>0.05) Note: Values with the same superscripts are not significantly different(P>0.05)

表 8 不同水平低分子FPH对大菱鲆幼鱼肝脏中 IGF-IR基因mRNA表达量的影响(平均值±标准差) Table 8 The effects of small molecular weight of fish protein hydrolysate levels on mRNA expression of IGF-IR gene in liver of juvenile turbot(Mean ± SD)

本研究中90%的FPH的分子量小于1000 Da，含有丰富的必需氨基酸、呈味氨基酸及牛磺酸。Oliva-Teles等(1999)在大菱鲆幼鱼饲料中添加不同水平的FPH，结果发现，FPH不能提高其摄食率。Refstie等(2004)在大西洋鲑(Salmo salar)饲料中添加不同水平的FPH，发现摄食率随着FPH添加水平的升高而升高；本研究的摄食率随着FPH添加量的升高而升高，且UF-20显著高于其他3组(P<0.05)，表明FPH能提高大菱鲆幼鱼的摄食率，因此，各实验组之间的生长差异不是由于饲料的适口性造成的，与Refstie等(2004)结果相似。许多研究表明，在一定范围内添加FPH可以提高鱼类的生长性能和饲料利用，但高水平的添加会造成鱼类生长性能的下降(Hevrøy et al，2005; Aksnes et al，2006b; 柳旭东等; 2010; 许团辉等，2012)。Espe等(2012)在大西洋鲑高植物蛋白饲料中添加水解浓缩鱼蛋白(FPC)的研究表明，几组实验饲料氨基酸组成相似，添加FPC没有改变饲料氨基酸组成，随着FPC的增加生长呈下降趋势，可能原因是消耗相同的饲料时，添加高水平FPC跟低水平相比会消耗更多的能量在代谢上，所以生长积累就少，表现出生长性能下降，该研究结果跟本研究的生长结果相似。本研究中高水平添加组UF-20的增重率、特定生长率等生长指标显著低于UF-0、UF-5、UF-10组(P<0.05)，UF-20组与UF-0、UF-5、UF-10组饲料氨基酸组成无显著差异(表 3)，说明高水平添加FPH抑制生长不是由于氨基酸不平衡造成的。Oliva-Teles等(1999)在大菱鲆幼鱼饲料中添加不同水平FPH，结果表明FPH对大菱鲆幼鱼的生长及饲料利用无促进作用，分析其原因可能是鱼粉含量较高，在这种高含量鱼粉基础饲料中加入FPH，可能会掩盖FPH的作用，而本研究对照组的鱼粉含量只有15%，UF-5、UF-10及UF-20组分别只含有11.5%、8%、1%的鱼粉，在低鱼粉含量条件下，UF-5、UF-10与对照组的增重率、特定生长率之间无显著差异(P>0.05)，未对大菱鲆幼鱼的生长造成不利影响，可见在低鱼粉含量条件下FPH的作用不可忽视。因此，高植物蛋白饲料中适量添加低分子FPH可节约鱼粉的使用量，提高植物蛋白饲料的利用率，从而降低生产成本，提高生产效益。

低分子FPH影响了鱼类的鱼体成分(郑珂珂等，2011; 卫育良等，2014)，许团辉等(2012)在牙鲆饲料中添加不同水平低分子FPH，发现添加4.5% FPH组(FPH₁₁)显著提高了鱼体粗蛋白和粗脂肪含量，高水平FPH组(FPH₂₆)粗蛋白含量最低。Zheng等(2013)在高植物蛋白的大菱鲆饲料中分别添加1.2%、3.7%的低分子水解鱼蛋白，发现水解鱼蛋白组提高了鱼体蛋白含量，且3.7%组鱼体粗蛋白含量显著高于对照组。与许团辉等(2012)和Zheng(2013)结果相似。本研究中UF-5和UF-10组的鱼体粗蛋白含量和粗脂肪含量显著高于对照组和UF-20组(表 6)，表明在大菱鲆幼鱼饲料中添加适量的低分子FPH可促进鱼体蛋白和脂肪的积累。

本研究通过对鱼体肌肉氨基酸分析，4组实验鱼在测得的16种氨基酸中，除了精氨酸含量没有差异外，其他氨基酸都有差异(表 7)，表明添加FPH对实验鱼肌肉氨基酸组成有影响。Espe等(1993、1999)发现，饲料中添加水解鱼蛋白使大西洋鲑血浆和肌肉中的氨基酸浓度增加。Hevrøy等(2005)研究发现，添加不同水平的FPH对大西洋鲑鱼体肌肉氨基酸组成无显著影响。而本研究的4组鱼体肌肉中蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸几种必需氨基酸的含量较高，且UF-5组肌肉中的苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸3种氨基酸含量、必需氨基酸含量及必需氨基酸与非必需氨基酸比值显著高于其他3组(P<0.05)，说明低水平FPH可以促进肌肉必需氨基酸的吸收积累，提高鱼体肌肉必需氨基酸的含量。

类胰岛素生长因子受体是胰岛素生长因子家族中的一员，广泛存在于脊椎动物体内(Toyoshima et al，2008; Laustsen et al，2006)。关于虹鳟、大菱鲆(Elies et al，1996)、斑马鱼(Ayaso et al，2002)和牙鲆(Nakao et al，2002)等的IGF-IR结构和生理功能的研究早有报道。IGF-IR是一种跨膜酪氨酸激酶，通过促进细胞有丝分裂抑制细胞凋亡，促进胚胎、神经和骨骼的生长发育，对鱼类的生长和发育有重要的调节作用。IGF-IR在IGF家族中发挥重要作用，IGF-IR结合IGF-I以促进IGF-I跨血管壁运输(Chauvigne et al，2003)，延长IGF-I在血液中的半衰期，提高IGF-I的促生长作用。IGF-IR mRNA的表达受到营养、温度及应激等因素的影响(Chauvigne et al，2003; 沈文英等，2012; Montserrat et al，2007)。Gabillard等(2003)对虹鳟的研究表明，水温跟食物差异都会对虹鳟IGF-IR mRNA的表达进行调节。Valentinis等(2001)研究发现，IGF-IR的信号传递作用与胰岛素受体底物1(Insulin receptor substrate 1，IRS-1)的浓度有关：IRS-1浓度高时，IGF-IR就会传递促有丝分裂、抗细胞凋亡的信号；浓度低时，IGF-IR就会传递变异信号，导致造血细胞的粒系分化。本研究UF-20组肝脏中IGF-IR mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05)，但生长却显著低于对照组(P<0.05)，可能与鱼体内的IRS-1浓度有关。同时，本研究IGF-IR的相对定量表达的结果与张俊玲等(2012)提出的IGF-IR的表达不一致，推断IGF-IR的高表达量是对体内IGF-I低表达量的一种补偿，从而使IGF-I保持组织敏感性和促生长活性，但仍需要进一步的实验来证明IGF-IR与IGF-I表达的关系。

高植物蛋白饲料中添加低水平低分子FPH(UF-5)可促进大菱鲆幼鱼的生长，提高饲料利用率，促进肌肉必需氨基酸的积累。添加高水平FPH(UF-20)抑制其生长，添加低分子FPH可提高肝脏中IGF-IR基因的表达量。因此，大菱鲆幼鱼的高植物蛋白饲料中可适当添加低分子FPH以节约鱼粉使用量，提高植物蛋白的利用。