微粒饲料中以微藻粉替代鱼油对牙鲆(<i>Paralichthys olivaceus</i>)稚鱼生长存活和脂肪酸组成的影响

引用本文

乔洪金, 王际英, 张利民, 孙春晓, 李宝山, 丛超, 宋志东, 柳旭东. 微粒饲料中以微藻粉替代鱼油对牙鲆(Paralichthys olivaceus)稚鱼生长存活和脂肪酸组成的影响[J]. 渔业科学进展, 2016, 37(5): 56-63. DOI: 10.11758/yykxjz.20150601001. 复制到剪切板

QIAO Hongjin, WANG Jiying, ZHANG Limin, SUN Chunxiao, LI Baoshan, CONG Chao, SONG Zhidong, LIU Xudong. Effects of Dietary Fish Oil Replacement by Microalgae in Microdiets on Growth Performance, Survival and Fatty Acid Profile of Japanese Flounder (Paralichthys olivaceus) Juveniles[J]. Progress In Fishery Sciences, 2016, 37(5): 56-63. DOI: 10.11758/yykxjz.20150601001. 复制到剪切板

基金项目

山东省科技发展计划(2014GHY115006)、海洋生物产业水生动物营养与饲料研发创新示范平台(201601002)、国家海洋公益性行业专项(201205025)、山东省优秀中青年科学家奖励基金(BS2013HZ018)和山东省水生动物营养与饲料泰山学者岗位(HYK201004)共同资助

作者简介

乔洪金，E-mail: hongjinqiao@hotmail.com

通讯作者

王际英，研究员，E-mail: ytwjy@126.com

文章历史

收稿日期：2015-06-01
收修改稿日期：2015-07-03

Contents Abstract Full text Figures/Tables PDF

微粒饲料中以微藻粉替代鱼油对牙鲆(Paralichthys olivaceus)稚鱼生长存活和脂肪酸组成的影响

乔洪金¹, 王际英¹, 张利民¹, 孙春晓¹, 李宝山¹, 丛超^1,2, 宋志东¹, 柳旭东¹

1. 山东省海洋资源与环境研究院山东省海洋生态修复重点实验室烟台 264006;
2. 上海海洋大学水产与生命学院上海 201306

收稿日期：2015-06-01 ；收修改稿日期：2015-07-03

基金项目：山东省科技发展计划(2014GHY115006)、海洋生物产业水生动物营养与饲料研发创新示范平台(201601002)、国家海洋公益性行业专项(201205025)、山东省优秀中青年科学家奖励基金(BS2013HZ018)和山东省水生动物营养与饲料泰山学者岗位(HYK201004)共同资助

作者简介：乔洪金，E-mail: hongjinqiao@hotmail.com

通讯作者：王际英，研究员，E-mail: ytwjy@126.com

摘要：以18日龄的牙鲆(Paralichthys olivaceus)稚鱼为研究对象，通过11 d的生长实验，研究了添加不同比例的微藻粉替代鱼油对牙鲆稚鱼生长、存活率和脂肪酸组成的影响。以鱼油组(FO)为对照组，以裂壶藻粉(Schizochytrium sp.)、微绿球藻粉(Nannochloropsis sp.)和橄榄油替代不同比例的鱼油，配制成5组等氮等能的实验饲料，分别命名为鱼油组(FO)，50%混合替代组(M50)、100%混合替代组(M100)、100%裂壶藻橄榄油替代组(S100)、100%微绿球藻橄榄油替代组(N100)。结果显示, 微藻粉替代鱼油对牙鲆稚鱼的生长无显著影响；含有裂壶藻的各饲料组(M50、M100、S100)成活率显著高于FO组和N100组(P˂0.05)；微藻粉替代鱼油不影响牙鲆稚鱼主要脂肪酸的组成；Person相关性分析发现，C14:0、C16:1n-7、C18:2n-6、C20:0、C18:3n-3、C22:0、C20:4n-3、EPA、C22:5n-6和DHA的百分含量均与其饲料中的百分含量呈显著正相关(P < 0.05)；总饱和脂肪酸、总单不饱和脂肪酸、n-3多不饱和脂肪酸的百分含量以及DHA/EPA比率均与其饲料组成表现出显著正相关(P < 0.05)。综上所述，微藻作为脂肪源替代鱼油完全可以满足牙鲆稚鱼的生长和发育，各种脂肪酸均可以被牙鲆稚鱼充分消化和吸收，并且添加两种微藻后提高了稚鱼的DHA含量和DHA/EPA比率，与鱼油对照组相比显著提高了牙鲆稚鱼的成活率。因此，以微藻替代鱼油在牙鲆稚鱼的培育中是可行的。

关键词: 牙鲆稚鱼微粒饲料微藻鱼油脂肪酸

Effects of Dietary Fish Oil Replacement by Microalgae in Microdiets on Growth Performance, Survival and Fatty Acid Profile of Japanese Flounder (Paralichthys olivaceus) Juveniles

QIAO Hongjin¹, WANG Jiying¹, ZHANG Limin¹, SUN Chunxiao¹, LI Baoshan¹, CONG Chao^1,2, SONG Zhidong¹, LIU Xudong¹

1. Shandong Provincial Key Laboratory of Restoration for Marine Ecology, Shandong Marine Resource and Environment Research Institute, Yantai 264000 ;
2. College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306

Corresponding author: WANG Jiying, E-mail: ytwjy@126.com

Abstract: The aim of this study was to determine if algal products rich in DHA or EPA are able to completely replace fish oil in microdiets for marine fish juveniles, Japanese flounder Paralichthys olivaceus. To address the problem, an 11-d feeding experiment was carried out on 18-day old juveniles. The experimental subjects were fed with five groups of isolipidic and isoenergetic microdiets that were control group with fish oil (FO), 50% replacement group by mixed Schizochytrium sp., Nannochloropsis sp. and olive oil (M50), 100% replacement group (M100), 100% replacement group by Schizochytrium sp. and olive oil (S100), and 100% replacement group by Nannochloropsis sp. and olive oil (N100). The results showed that there were no significant effects of fish oil replacement with microalgae on growth. The groups containing Schizochytrium sp. (M50, M100 and S100) had higher survival rates than FO and N100 groups. No changes in the major fatty acid compositions of juveniles were observed with the replacement of fish oil by microalgae. In addition, Pearson correlation analysis showed that the percentage content of C14:0, C16:1n-7, C18:2n-6, C20:0, C18:3n-3, C22:0, C20:4n-3, EPA, C22:5n-6 and DHA in juveniles were significantly and positively correlative to those in diets (P < 0.05). The same correlations were also observed for total saturated, monounsaturated and n-3 polyunsaturated fatty acids, and DHA/EPA ratio. In conclusion, fish oil replacement with microalgae as lipid sources can fully satisfy the growth and development in juvenile flounder, and fatty acids in microalgae can be effectively digested and absorbed. Furthermore, the addition of microalgae in diets enhanced the DHA content and DHA/EPA ratio in juveniles, and hence improved the survival. Therefore, the fish oil replacement with microalgae in the culture of Japanese flounder juveniles is feasible. This study will be helpful and suggestive for screening new lipid sources to replace strained fish oil resource.

Key words: Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) juveniles Microdiets Microalgae Fish oil Fatty acids

高不饱和脂肪酸(HUFA)作为海水鱼类饲料中的必需营养素，目前主要来源于鱼油。进入21世纪以来，鱼油价格伴随着捕捞量的骤减和养殖业规模的扩大而快速上涨，导致海水鱼饲料的成本随之上升，“以鱼养鱼”的养殖模式已经显现出不可持续的趋势，寻找鱼油替代原料已成为当务之急。植物油价格低、产量高，是替代鱼油的首选。然而，由于植物油不含HUFA，完全以植物油替代鱼油往往不利于鱼体的健康(Mourente, 2003)和肌肉品质(López, 2005; Noffs et al, 2009)。因此，水产饲料中必须添加HUFA以保证养殖产量和营养品质。

从食物链的传递关系来看，鱼体内的HUFA多数来自食物链底层的微藻。目前，微藻的规模化生产已经使其成本显著下降，因此，利用微藻替代鱼油将是解决鱼油危机的理想途径。Harel等(2002)利用异养微藻对轮虫(Brachionus plicatilis)和卤虫(Artemia saline)进行营养强化，在轮虫和卤虫体内检测到了显著提高的HUFA含量；在条纹鲈鱼(Morone saxatilis)亲鱼中以微藻粉替代60%的鱼油对其生长无显著影响。在大西洋鲑(Salmo salar)中以微藻粉替代鱼油，替代后对鱼的生长和体组成等无显著影响，但攻毒实验的表现要逊于鱼油组(Carter et al, 2003; Miller et al, 2007)。在金头鲷(Sparus aurata)仔稚鱼饲料中添加微藻粉不仅提高了鱼体DHA的含量，而且促进了生长，提高了成活率(Atalah et al, 2007; Ganuza et al, 2008)。

本研究采用富含DHA的裂壶藻(Schizochytrium sp.)和富含EPA的微绿球藻(Nannochloropsis sp.)替代鱼油，研究对牙鲆稚鱼生长和脂肪酸组成的影响，以评估在海水鱼微粒子饲料中以微藻粉替代鱼油的可行性。

1 材料与方法 1.1 实验饲料

以白鱼粉、虾粉为主要蛋白源，鱼油为脂肪源，配制粗蛋白含量为55%、粗脂肪含量为11%的基础饲料。在此基础上，用裂壶藻粉(美国Alltech公司)和微绿球藻粉(烟台海融生物技术有限公司)替代基础饲料中的鱼油，以橄榄油(西班牙Oleoestepa公司)作为补充以平衡各组的脂肪含量，配制成5组等氮等能的实验饲料，分别命名为鱼油组(FO)，50%混合植物油替代组(M50)、100%混合植物油替代组(M100)、100%裂壶藻橄榄油替代组(S100)、100%微绿球藻橄榄油替代组(N100)。饲料配方及营养组成见表 1。各组饲料的脂肪酸组成见表 2。饲料原料粉碎过80目筛，按比例称量混匀后加油脂均匀混合，然后将明胶溶于80℃水中，与混合物均匀混合，立即装入裱花袋中制粒，制成后于40℃烘24 h，将颗粒磨碎后过80目筛即得微粒子饲料，将其保存于-20℃冰箱备用。

表 1 实验饲料的配方和成分 Table 1 Ingredients and proximate composition of the experimental diets

组分 Ingredients (g/kg)	鱼油组 Fish oil	鱼油藻混合组 Mixed fish oil and microalgae	藻混合组Mixed microalgae	裂壶藻组 Schizochytrium sp.	微绿球藻组 Nannochloropsis sp.
组分 Ingredients (g/kg)	FO	M50	M100	S100	N100
复合蛋白源 Mixed protein source	724.4	675.1	0	0	0
脱脂复合蛋白源 Defatted mixed protein source	0	0	580.7	639.7	606.4
鱼油Fish oil	28.7	14.4	0	0	0
橄榄油Olive oil	0	37.4	21.3	37.7	73.3
裂壶藻Schizochytrium sp.	0	38.5	192.4	192.4	0
微绿球藻Nannochloropsis sp.	0	64.0	93.9	0	93.9
大豆卵磷脂Soy lecithin	38.0	37.1	36.1	36.1	36.1
抗氧化剂Antioxidant	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
诱食剂Attractant	8.0	8.0	8.0	8.0	8.0
多维Vitamin mixture	19.2	19.2	19.2	19.2	19.2
多矿Mineral mixture	19.2	19.2	19.2	19.2	19.2
微晶纤维素Microcrystalline cellulose	133.4	58.2	0.0	18.6	114.8
明胶Gelatin	28.7	28.7	28.7	28.7	28.7
主要成分Proximate composition (%干物质基础，% dry matter basis)
粗蛋白Crude protein (%)	54.9	55.3	55	55.5	54.5
粗脂肪Crude lipid (%)	11.5	11.1	10.7	11.4	10.6
粗灰分Crude ash (%)	17.2	17.2	18.4	18.5	17.2
总能Gross energy (kJ/g)	19.8	20.1	19.9	20.4	19.3
复合蛋白源Mixed protein source：白鱼粉:虾粉=9:1混合而成White fish meal: shrimp meal=9:1 脱脂复合蛋白源Defatted mixed protein source：复合鱼粉索氏抽提去脂肪后获得Mixed fish meal was defatted by Soxhlet extraction 裂壶藻Schizochytrium sp.：蛋白含量Protein content 9.6%，脂肪含量Lipid content 27.0%，DHA占总脂含量Percentage content of DHA in total lipid 20.1%，无EPA Without EPA 微绿球藻Nannochloropsis sp.：蛋白含量Protein content 45.2%，脂肪含量Lipid content 17.5%，EPA占总脂含量Percentage content of EPA in total lipid 5.3%，无DHA Without DHA 诱食剂Attractant：肌苷-5′-单磷酸Inosine 5′-monophosphate 2 g/kg；甜菜碱Betaine 2 g/kg；牛磺酸Taurine 4 g/kg 多维Vitamin mixtures(mg/100 g diets):氯化胆碱Choline chloride(2965.8)，肌醇Inositol(1450.9)，烟酸Nicotinic acid (290.16)，维生素C Ascorbyl polyphosphate (180)，维生素E α-tocopherol (150)，对氨基苯甲酸p-aminobenzoic acid(145)，泛酸钙Calcium panthotenate(101.59)，核黄素Riboflavin(72.53)，维生素B1 Thiamin HCl(21.77)，维生素B6 Piridoxyne HCl (17.28)，维生素K Menadione(17.28)，维生素D3 Cholecalciferol(3.65)，维生素A Retinol acetate(0.18)，维生素B12 Cyanocobalamin(0.03) 多矿Mineral mixture (mg/kg diet): MgSO₄·7H₂O, 3568.0; NaH₂PO₄·2H₂O, 25568.0; KCl, 3020.5; KAl(SO₄)₂, 8.3; CoCl₂, 28.0; ZnSO₄·7H₂O, 353.0; Ca-lactate, 15968.0; CuSO₄·5H₂O, 9.0; KI, 7.0; MnSO₄·4H₂O, 63.1; Na₂SeO₃, 1.5; C₆H₅O₇Fe·5H₂O, 1533.0; NaCl, 100.0; NaF, 4.0

表 1 实验饲料的配方和成分 Table 1 Ingredients and proximate composition of the experimental diets

表 2 实验饲料的脂肪酸组成 Table 2 Fatty acid compositions of the experimental diets

脂肪酸Fatty acid	饲料组Diets
脂肪酸Fatty acid	FO	M50	M100	S100	N100
C14:0	1.76	2.24	4.64	4.28	0.85
C16:0	15.91	18.13	23.18	22.43	16.81
C16:1n-7	4.62	4.52	2.24	0.64	3.59
C18:0	3.31	2.64	1.53	1.65	2.69
C18:1n-9	10.20	22.74	8.25	13.16	44.03
C18:1n-7	4.65	3.71	1.20	1.44	3.03
C18:2n-6	14.47	12.14	8.65	9.28	17.76
C20:0	0.15	0.20	0.15	0.17	0.26
C18:3n-6	1.04	0.65	0.15	0.17	0.39
C18:3n-3	1.46	0.90	0.17	0.97	1.62
C20:3n-6	0.87	0.54	0.28	0.27	0
C22:0	0.15	0.13	0.11	0.14	0.17
C22:1n-11	0	0.16	0.31	0.26	0.07
C20:3n-3	1.53	0.19	0.76	0.74	0
ARA	0.78	0.86	0.96	0.56	0.80
C20:4n-3	0.43	0.32	0.56	0.55	0
C24:0	0	0	0.19	0.19	0.11
EPA	12.78	8.46	4.45	2.22	4.59
C22:5n-6	0.48	2.37	10.90	10.81	0.21
C22:5n-3	1.88	0.88	0.45	0.43	0
DHA	18.49	14.23	28.75	28.64	2.25
其他Others	5.07	3.99	2.13	0.99	0.77
SAT	21.27	23.34	29.80	28.86	20.89
MUFA	19.46	31.14	12.00	15.50	50.72
PUFA(n-3)	36.56	24.97	35.14	33.55	8.46
HUFA(n-3)	33.15	23.57	33.65	31.29	6.84
n-3/n-6	2.07	1.51	1.68	1.59	0.44
DHA/EPA	1.45	1.68	6.46	12.93	0.49

表 2 实验饲料的脂肪酸组成 Table 2 Fatty acid compositions of the experimental diets

1.2 饲养管理和样品采集

养殖实验于2014年4月在山东蓬莱宗哲水产养殖有限公司育苗车间进行。选取孵化后18 d的牙鲆稚鱼，随机放养于15个圆形塑料养殖桶中(直径50 cm，高80 cm，水深控制在50 cm左右)，每桶200尾，每种饲料随机投饲3桶。实验水温控制在18℃左右，溶氧80%以上，光照周期为12 h:12 h，在光照周期内每1 h向水面均匀抛洒1次微粒子饲料(2 g/d)，每日换1/2桶水，投喂结束后，清理水面残饵并用虹吸法去除底部的残饵粪便。实验共进行11 d，在实验开始后, 前4 d每天投喂酵母强化的卤虫1次(1.5个/ml)。

实验结束后，计数存活条数，计算成活率；实验前后用带有目微尺的显微镜测量20条鱼的体长；用蒸馏水冲洗3次，于110℃烘干至恒重，测定体重；剩余稚鱼用蒸馏水冲洗后保存于–80℃备用。

1.3 脂肪酸分析

将用于测定脂肪酸的样品(稚鱼和饲料)冷冻干燥至恒重，研磨成粉末，按照Qiao等(2015)的方法进行转酯化。取所得脂肪酸甲酯的正己烷溶液2 μl进行气相色谱(岛津GC-2010)测定，所用毛细管柱为Supelco SP-2560(100 m×0.25 mm，膜厚度0.20 μm)，进样口和检测器的温度设定为260℃，柱温升温程序为140℃，以4℃/min的速率升高至240℃并恒温10 min，以高纯N₂作为载气，通过与37种脂肪酸混标(美国Supelco公司)对照确定脂肪酸组分。

1.4 数据处理与分析

实验数据采用SPSS 11.0软件(美国SPSS公司)进行单因素方差分析(One-way ANOVE)，差异显著则进行Duncan’s多重比较检验，显著水平设定为0.05。对鱼体的脂肪酸百分含量与其饲料中的百分含量进行Person相关性分析，显著水平设定为0.05，极显著水平设定为0.01。统计数据均以平均值±标准差(Mean±SD)的形式表示。

2 结果 2.1 微藻粉替代鱼油对牙鲆稚鱼生长和成活率的影响

从表 3可以看出，实验前后牙鲆稚鱼的体重和体长均表现出增长。其中，各饲料组之间平均体重的差异不显著，M50组的平均体重最大，N100组的平均体重最小；M50组的平均体长最大，N100组的平均体长最小，M50组的平均体长显著大于M100组和N100组；M100组的成活率最高，FO组的成活率最低，但与N100组差异不显著，M50组、M100组、S100组的成活率显著高于FO组和N100组，也即包含裂壶藻的饲料组其成活率显著高于其他组。

表 3 牙鲆稚鱼实验前后的全长、体重和成活率 Table 3 Initial and final total length, body weight and survival rate of Japanese flounder juveniles

2.2 微藻粉替代鱼油对牙鲆稚鱼脂肪酸组成和含量的影响

从表 4可以看出，不管投喂何种饲料，牙鲆稚鱼主要的几种脂肪酸分别为C16:0(15.61%–19.78%)、C18:0 (8.14%–9.52%)、C18:1n-9(10.84%–17.06%)、C18:1n-7 (4.33%–5.70%)、C18:2n-6(3.49–7.10%)、ARA(2.69%–4.36%)、EPA(2.73%–7.42%)和DHA(11.15%–23.29%)。与实验前投喂卤虫的稚鱼相比，投喂微粒子饲料降低了C16:1n-7、C18:3n-6、C18:3n-3、C20:3n-3、C20:4n-3和C22:5n-3等几种非主要脂肪酸的百分比，但投喂卤虫的稚鱼主要脂肪酸的组成均在各微粒子饲料组的变化范围内。

表 4 牙鲆稚鱼实验前后的脂肪酸组成分析及与饲料脂肪酸组成的Pearson相关分析 Table 4 Initial and final fatty acid composition of Japanese flounder juveniles and Pearson correlation analysis of fatty acid composition in diets (%)

脂肪酸 Fatty acid	实验前 Before experiment	实验后After experiment					r
脂肪酸 Fatty acid	实验前 Before experiment	FO^#	M50^#	M100^#	S100^#	N100^#	r
C14:0	1.44	1.04±0.09^ab	1.05±0.27^ab	1.44±0.24^c	1.33±0.06^ac	0.74±0.04^b	0.978**
C16:0	15.61	17.14±0.25^ac	17.5±0.43^a	19.78±1.23^b	18.78±0.31^b	16.56±0.36^c	0.228
C16:1n-7	4.55	2.95±0.16^a	2.90±0.26^a	1.96±0.09^b	1.41±0.09^c	2.53±0.13^d	0.999**
C18:0	8.17	8.64±0.22^a	7.73±0.5^b	8.36±0.17^a	8.14±0.11^ab	9.52±0.17^c	-0.399
C18:1n-9	14.99	12.82±0.14^a	16.88±1.03^b	10.84±0.43^c	12.17±0.14^a	17.06±1.12^b	0.852
C18:1n-7	4.73	5.13±0.29^ab	4.33±0.80^a	5.00±0.26^ab	4.89±0.39^ab	5.70±0.49^b	-0.020
C18:2n-6	3.49	6.35±0.54^a	6.56±0.49^a	4.57±0.18^b	4.64±0.13^b	7.10±0.54^a	0.919*
C20:0	0.11	0.20±0.06^a	0.22±0.02^ab	0.21±0.04^a	0.22±0.00^ab	0.28±0.03^b	0.955*
C18:3n-6	1.12	0.79±0.08^a	0.83±0.07^a	0.36±0.03^b	0.43±0.05^b	0.66±0.03^c	0.865
C18:3n-3	3.5	1.61±0.16^a	1.33±0.03^b	1.03±0.04^c	1.09±0.11^c	1.88±0.13^d	0.884*
C20:3n-6	0.27	0.47±0.07	0.4±0.07	0.44±0.03	0.41±0.05	0.49±0.05	-0.149
C22:0	0.49	0.26±0.02^ab	0.23±0.02^ab	0.22±0.02^a	0.23±0.03^ab	0.26±0.00^b	0.896*
C22:1n-11	0.77	0.41±0.08^ab	0.36±0.06^a	0.47±0.03^b	0.47±0.03^b	0.59±0.03^d	-0.027
C20:3n-3	1.8	1.53±0.38	1.23±0.21	1.23±0.20	1.34±0.09	1.52±0.15	0.252
ARA	3.38	3.20±0.23^a	2.69±0.29^b	3.17±0.28^ab	3.09±0.18^ab	4.36±0.26^d	-0.013
C20:4n-3	2.28	0.71±0.09^a	0.64±0.02^ab	0.64±0.02^ab	0.62±0.02^b	0.91±0.05^c	-0.905*
C24:0	0.28	0.30±0.06^ac	0.70±0.05^b	0.25±0.04^c	0.24±0.03^c	0.34±0.04^a	-0.671
EPA	6.28	7.42±0.51^a	6.30±0.19^b	3.58±0.36^c	2.73±0.13^d	5.75±0.15^b	0.892*
C22:5n-6	2.33	1.98±0.13^a	3.46±0.14^b	8.13±0.42^c	8.61±0.31^c	2.45±0.32^a	0.996**
C22:5n-3	3.29	2.84±0.08^a	2.07±0.06^b	1.49±0.18^c	1.39±0.11^c	2.95±0.16^a	0.292
DHA	11.15	19.16±0.41^a	17.29±0.46^b	22.77±1.20^c	23.29±0.67^c	12.80±0.56^d	0.999**
其他Others	9.98	5.05±0.82	4.84±2.56	4.06±0.21	4.48±0.93	5.54±0.24	-
SFA	26.1	27.59±0.10	27.89±0.71	30.28±1.74	28.94±0.37	27.70±0.35	0.930*
MUFA	25.04	21.31±0.36^a	24.47±1.88^b	18.27±0.70^c	18.95±0.38^c	25.88±1.12^b	0.940*
PUFA(n-3)	28.31	33.26±0.38^a	28.85±0.20^b	30.73±1.51^c	30.45±0.53^c	25.81±0.89^d	0.942*
HUFA(n-3)	20.72	29.41±0.67^a	25.66±0.4^c	27.83±1.64^ab	27.41±0.62^b	21.49±0.87^d	0.976*
n-3/n-6	2.68	2.60±0.07^a	2.07±0.04^b	1.84±0.03^c	1.77±0.01^cd	1.71±0.06^d	0.679
DHA/EPA	1.78	2.59±0.18^a	2.75±0.14^a	6.39±0.45^b	8.55±0.53^c	2.23±0.04^d	0.983**
^#数据均为平均值±标准差(n=3)；同一列中不同字母标记的值表示差异显著；表示相关性显著(P < 0.05)，表示相关性极显著(P < 0.01) ^#Values (Mean±SD of three replicates) within the same row labeled with different letters were significantly different; represents significant difference (P < 0.05); ** represents highly significant difference (P < 0.01)

各组饲料投喂的稚鱼总饱和脂肪酸(SFA)百分含量无显著性差异，其中，M100组和S100组的C14:0和C16:0百分含量均显著高于其他各组，与其在饲料中的高含量一致；M100组和S100组的MUFA含量显著低于其他各组，也与其在饲料中的低含量一致；M100组和S100组的PUFA(n-3)含量显著高于其他各组，其中，DHA含量也显著高于其他各组，与其饲料组成一致。HUFA(n-3)含量在藻粉替代后出现显著下降，其中，M100组和S100组显著高于M50和N100组。n-3/n-6随着藻粉替代量的增加呈现出逐渐下降的趋势，但与其饲料组成的变化不一致；鱼体DHA/EPA随着藻粉替代量的增加呈现先上升后下降的趋势，与其饲料组成的变化一致。

通过Pearson相关性分析发现，C14:0、C16:1n-7、C18:2n-6、C20:0、C18:3n-3、C22:0、C20:4n-3、EPA、C22:5n-6和DHA的百分含量均与其饲料中的百分含量呈显著正相关(P < 0.05)，其中，C14:0、C16:1n-7、C22:5n-6和DHA表现出极显著正相关(P < 0.01)；C20:4n-3的百分含量与其饲料中的百分含量呈现出显著负相关(P < 0.05)。从汇总指标来看，SFA、MUFA、PUFA(n-3)和HUFA(n-3)百分含量以及DHA/EPA均与其饲料组成表现出显著正相关(P < 0.05)，并且DHA/EPA表现出极显著正相关(P < 0.01)。

3 讨论 3.1 微藻粉替代鱼油对牙鲆稚鱼生长和发育的影响

牙鲆仔稚鱼的必需脂肪酸主要为EPA和DHA (n-3 HUFA)，二者对其生长、成活率、耐盐性和脑的发育具有显著影响(Furuita et al, 1998、1999)。Izquierdo等(1992)研究表明，饵料卤虫中n-3 HUFA升高到3.5%时，显著增加了牙鲆仔稚鱼的生长，但进一步提高n-3 HUFA的水平不能继续促进生长。本研究中n-3 HUFA水平在2.6%(M50组)以上时，生长也未出现显著差异，在0.7%(N100组)时体重增加减小，但无显著差异，与上述研究结果相似。

与对照组(FO)相比，添加微藻粉替代鱼油没有显著影响到牙鲆稚鱼的生长和成活率(表 3)，这与其他研究结果一致(Atalah et al, 2007; Ganuza et al, 2008; Eryalçın et al, 2013)，并且鱼体内各种脂肪酸的含量也与饲料中的含量有对应关系(表 4)，表明微藻粉完全可以被牙鲆稚鱼消化利用。添加裂壶藻的各组(M50组，M100组和S100组)成活率显著高于其他组，可能与其DHA/EPA比率较高有关(表 2)，DHA/EPA比率的提高有助于海水鱼稚鱼的生长和存活(Rodriguez et al, 1994; 1997; Reitan et al, 1994; Copeman et al, 2002)。

N100组在体长和体重上均低于其他各组，成活率低于添加裂壶藻的各组，表明DHA的缺乏影响了牙鲆稚鱼的生长和存活，这与DHA在稚鱼发育中的重要作用有关。许多研究均表明，DHA的缺乏会导致海水鱼稚鱼生长减缓，成活率降低，体色紊乱(刘镜恪, 2002; Izquierdo et al, 2000; Reitan et al, 1994; Watanabe, 1993)。在稚鱼发育过程中，DHA往往被选择性地保留在极性脂(磷脂)中。因此，在磷脂构成的生物膜中，DHA发挥着调节膜流动性的作用，DHA大量被储存在嗅觉神经、视网膜和中枢神经系统中，提高了捕食的灵敏性和能量收支(Izquierdo et al, 1996)。

3.2 鱼体脂肪酸组成与饲料组成的关系

脂肪酸在鱼体内的沉积一般受到饲料脂肪酸含量的影响(Bell et al, 1994; Sargent et al, 1995)，饲料脂肪酸的组成往往和鱼体内的脂肪酸组成具有一致性(Gatlin et al, 1982; Lee, 2001)。本研究中牙鲆稚鱼脂肪酸的组成和含量随着饲料中脂肪酸组成和含量而变化，其中多种脂肪酸呈现出显著的正相关。在SFA中，C14:0和C20:0均表现出显著正相关，而C16:0，C18:0和C24:0却没有显著相关性，这可能与鱼类以C16:0，C18:0为主要饱和脂肪酸有关，这两种饱和脂肪酸均可以在鱼类体内从头合成，而且还大量被分解供能，因此，并没有随着饲料含量的改变而改变(Sargent et al, 1989; Tocher, 2010)。在MUFA中，仅C16:1n-7表现出正相关，鱼类具有合成各种MUFA的能力，但是仅大量分解利用其中的C18:1n-9、C20:1n-9和C22:1n-11(Henderson et al, 1984、1989)。因此，饲料中较高含量的C16:1n-7得以在鱼体内沉积，但是对C18:1n-7目前尚未明确合成和代谢的结论。由于脊椎动物包括鱼类一般都缺乏△12和△15去饱和酶，不能从C18:1n-9合成C18:2n-6和C18:3n-3 (Tocher et al, 2010)，鱼体内的这两种脂肪酸几乎全部来源于饲料，因此，表现出显著正相关。各饲料组中C18:2n-6的含量都很高，这导致了C18:2n-6在鱼体内的含量普遍高于实验前鱼体内的含量，并且其鱼体内的沉积与饲料中的含量呈现出明显的正相关，可能与饲料中的C18:2n-6在鱼体内被直接地吸收和酯化有关(Henderson, 1996)，这与对杂交条纹鲈(Morone saxatilis) (Nematipour et al, 1993)和虹鳟(Salmo gairdnerii) (Henderson et al, 1981)的研究结果相似。

牙鲆稚鱼体内的DHA和EPA含量随着饲料中DHA和EPA含量的增加而增加，特别是DHA的含量表现出极显著的正相关性(P˂0.01)，表明这两种主要的高不饱和脂肪酸几乎全部来自于饲料，也导致了鱼体DHA/EPA与饲料组成呈现出极显著正相关(P˂0.01)，这与牙鲆仔稚鱼不能自身合成DHA和EPA有关(刘镜恪，2002)，并且进一步说明，微藻中的DHA和EPA可以被牙鲆稚鱼有效地消化和吸收，增加组织中DHA和EPA的含量。饲料中低的DHA含量倾向于促进DHA在鱼体内的沉积，在鱼类组织中EPA的消耗也有利于DHA的沉积(Bell et al, 1985)，在牙鲆稚鱼体内DHA/EPA的比值均大于1，即使N100组饲料的DHA/EPA比值为0.49，其对应鱼体DHA/ EPA也达到2.23，表明了牙鲆稚鱼具有选择性保留DHA的机制，而且对DHA的需求量可能要高于EPA。

DHA/EPA比率与成活率之间也存在着正相关，饲料中较高的DHA/EPA提高了牙鲆稚鱼的成活率，然而，S100组最高的DHA/EPA却未导致最高的成活率(表 1，表 4)。这与DHA和EPA在仔稚鱼发育过程中的不同作用有关，许多研究表明，DHA可能发挥着更为关键的作用(Takeuchi et al, 1990; Watanabe, 1993; Hirofumi et al, 1999; 常青等, 2009)。

牙鲆稚鱼体内C22:5n-3的含量与饲料中C22:5n-3没有相关性，并且N100组饲料中检测不到C22:5n-3，而稚鱼体内却出现了最高含量的C22:5n-3，这表明牙鲆稚鱼具有将EPA(C20:5n-3)加长为C22:5n-3的能力，这与Hirofumi等(1999)的研究结果一致。在饲料DHA供给不足的条件下(N100组)，有大量的DHA在鱼体内积累，饲料中DHA/EPA比率为0.49，也翻转为稚鱼体内的2.23，这暗示DHA可能来源于EPA，但牙鲆转化EPA为DHA的能力较低(Hirofumi et al, 1999)。因此，DHA选择性保留可能在其中发挥了更主要的作用，尚需进一步研究二者在其中所起的作用。

3.3 替代可行性

本研究表明，微藻作为脂肪源替代鱼油完全可以满足牙鲆稚鱼的生长和发育，其中起重要作用的DHA和EPA等高不饱和脂肪酸均可以被牙鲆稚鱼充分消化和吸收，并且添加两种微藻后提高了DHA的含量和DHA/EPA比率，与鱼油对照组相比显著提高了牙鲆稚鱼的成活率。因此，以微藻替代鱼油在牙鲆稚鱼的培育中是可行的，这与Atalah等(2007)和Ganuza等(2008)的研究结果一致。这些研究和本研究的结论是一致，海水鱼仔稚鱼具有完整的消化和吸收微藻脂肪酸的酶系，微藻中的高不饱和脂肪酸可以满足仔稚鱼的生长和发育，用微藻替代鱼油将是解决“以鱼养鱼”的技术瓶颈的重要途径。

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