2. 青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 青岛 266071
2. Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao 266071
我国鱼类繁殖生理研究始于20世纪50年代，在淡水鱼类“四大家鱼”人工繁育技术研究中取得进展，20世纪60年代以后，相继开展了“四大家鱼”性腺发育规律、生殖系统的结构、生理机制及内分泌控制等方面的研究，取得了人工繁殖生物学原理及应用技术的突破和发展(施瑔芳, 1992)。海水鱼类繁殖生理学研究起步相对较晚，20世纪80年代起，海水鱼类繁殖生物学及繁育技术快速发展，20世纪90年代以后，相继开展了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)、鳗鲡(Anguilla japonicus)等生殖内分泌研究，克隆了一批调控繁殖相关激素及其受体的功能基因，阐明了其结构、表达特征和调控繁殖的作用等(张勇等, 2010)。对于鲆鲽类生殖内分泌研究主要集中在近10年，针对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)等鲆鲽类，围绕“下丘脑-垂体-性腺轴”(Hypothalamus-pituitary-gonad axis, HPG轴)展开了较系统的研究，包括性腺发育规律、生殖内分泌系统结构、功能基因及其作用机制和调控原理等，相关研究取得一些进展(柳学周等, 2014a、b, 2015; 史宝等, 2013; Shi et al, 2016)。本文侧重对鲆鲽类生殖内分泌学研究热点现有资料进行总结分析，为进一步深入开展鲆鲽类生殖内分泌调控机制研究、完善生殖精准调控技术提供基础信息。
2 鲆鲽类生殖相关功能基因及其研究进展鱼类的生殖活动主要受“脑/下丘脑-脑垂体-性腺”HPG轴调控，脑/下丘脑分泌产生促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone, GnRH)刺激脑垂体促性腺激素(Gonadotropin, GtH)的合成与释放，促性腺激素作用于性腺，刺激性腺类固醇激素的生成与分泌，促进性腺发育成熟、配子生成排放。脑/下丘脑分泌产生许多神经内分泌因子可以直接或间接参与生殖轴的调控，例如刺激性因子神经肽Y (Neuropeptide Y, NPY)，抑制性因子多巴胺(Dopamine, DA)等调控GnRH和GtH的合成与分泌(林浩然, 2011)。目前，国内学者对多种鲆鲽类生殖相关功能基因进行了克隆表达和功能研究，主要研究了下丘脑的GnRH基因、垂体的GtH基因、性腺的芳香化酶基因(Aromatase, CYP19/CYP17)、雌激素受体基因(Estrogen receptor, ER)、雄激素受体基因(Androgen receptor, AR)、促滤泡激素受体基因(Follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)、促黄体激素受体基因(Luteinizing hormone receptor, LHR)、膜孕激素受体基因(Membrane progestin receptor, mPR)、新型膜孕激素受体基因(Membrane progestin receptor-like, mPRL)、类胰岛素生长因子(Insulin-like growth factor, IGF)等重要功能基因(表 1)。
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表 1 鲆鲽类HPG轴相关功能基因 Table 1 The functional genes in HPG axis of flatfish |
1) Zang K. Study on physiological function and in vitro recombinant expression of growth hormone and insulin-like growth factors from Platichthys stellatus. Master's Thesis of Shanghai Ocean University, 2014 [臧坤.星突江鲽生长激素和胰岛素样生长因子的生理功能及体外重组研究.上海海洋大学硕士研究生学位论文, 2014]
2.1 下丘脑组织功能基因 2.1.1 促性腺激素释放激素(GnRH)GnRH是HPG轴的关键内分泌调控激素，在鱼类性腺发育成熟中具有重要的调控作用，GnRH由下丘脑分泌产生，作用于垂体，刺激促性腺激素的产生释放，从而调控鱼类卵巢发育成熟。GnRH有4种存在方式，包括mGnRH (Mammalian GnRH)、sbGnRH (Seabream GnRH)、cGnRH Ⅱ (Chicken GnRH-Ⅱ)、sGnRH (Salmon GnRH)。其中，mGnRH和sbGnRH具有物种特异性，sbGnRH分布于中脑，在长期进化中非常保守，sGnRH是鱼类特有的，主要存在于端神经节(Kavanaugh et al, 2008)。
目前，在鲆鲽类中最多克隆获得3种GnRH亚型基因。在圆斑星鲽(Verasper variegatus)中发现了cGnRH-Ⅱ、sGnRH和sbGnRH 3个亚型基因，cGnRH-Ⅱ仅在脑中表达，sbGnRH在各个组织都有表达，sGnRH在脑、垂体和性腺中表达。脑中sbGnRH基因的表达水平随卵巢成熟过程逐渐升高，产卵前达到峰值，而其他2种GnRH基因在繁殖周期表达水平变化不显著，表明sbGnRH基因在调控圆斑星鲽性腺发育过程中起主要作用(柳学周等, 2013)。在半滑舌鳎中目前发现2种GnRH亚型，cGnRH-Ⅱ主要在脑中表达，雌性中的表达高于雄性，而sGnRH只在脑和性腺中表达，并发现在卵母细胞中存在，受精后表达逐渐升高，分析其具有母体遗传特性(赵明, 20111); Zhou et al, 2012)。牙鲆(Paralichthys olivaceus)的cGnRH-Ⅱ和sbGnRH基因在脑、垂体、卵巢、鳃、头肾和脾脏中有较丰富的表达，而在精巢中表达微量(房宝海等, 2006)。
1) Zhao M. Studies on reproductive physiological characteristics and molecular cloning of cGnRH-Ⅱ in tongue sole, Gynoglossus semilaevis Günther. Master's Thesis of Shanghai Ocean University, 2001 [赵明.半滑舌鳎生殖生理特性及GnRH克隆初步研究.中国海洋大学硕士研究生学位论文, 2011]
2.1.2 亲吻素及其受体(Kisspeptin/GPR54)和促性腺激素抑止激素及受体(GnIH/GnIH-R)Kisspeptin/GPR54和GnIH/GnIH-R均是GnRH的上游调控基因，由下丘脑分泌；Kisspeptin/ GPR54调控GnRH启动表达，调节青春期启动、参与GtH分泌释放(Ogawa et al, 2012)，在鱼类中Kisspeptin/ GPR54基因包括2种亚型(Kiss-1、Kiss-2)和2种受体基因(KissR1和KissR2) (Felip et al, 2009)。GnIH/GnIH-R基因在鹌鹑(Coturnix coturnix)中的作用与Kisspeptin对生殖轴的调控起着相反的作用，可抑制GnRH和GtH的合成与释放(Ogawa et al, 2014)。目前，仅在金鱼(Carassius auratus)等几种鱼类中克隆得到GnIH的同源基因，但是对其确切的生理功能尚不清楚(王滨等, 2016)。这两类基因在鲆鲽类的生理功能的研究正在进行中。
2.2 垂体组织功能基因促性腺激素(GtHs)由垂体分泌，包含卵泡刺激素(FSH)和促黄体素(LH)。它们由相同的α亚基和不同的β亚基以非共价键相连组成异源二聚体，单独的每个亚基只能保留GtH激素生物活性很小一部分，α亚基含抗原决定因素，β亚基具有特异的生物学作用；2个亚基结合在一起，行使生理功能。GtH与促性腺激素受体结合，诱导雌激素和孕激素合成，调控配子发生，其中，FSH基因在鱼类卵巢发育早期起主导作用，LH基因在调控卵巢成熟过程起主导作用(林浩然, 2011)。
在半滑舌鳎GtHs的研究中，已克隆获得FSHβ、LHβ、CGα 3种基因，GtHs在垂体中大量表达，脑和性腺中表达也相对较高，表明其生理功能主要作用于垂体、脑和性腺。从其繁殖周期的表达分析来看，FSHβ、LHβ和CGα基因在垂体中的表达随性腺发育持续升高，FSHβ基因在性腺发育至Ⅳ期时的垂体中表达量最高，而LHβ和CGα基因至Ⅴ期时的垂体中表达量最高；表明FSH调控卵巢早期发育；LH的生理功能主要对卵母细胞最终成熟及卵子排出起作用(李晓晓等, 2013; 王珊珊等, 2013; 柳学周等, 2014a)。对漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma) LHβ基因表达特性分析表明，卵巢中LHβ基因表达水平也是在Ⅴ期达到峰值，证实LHβ基因在调控卵巢成熟过程中起主导作用(柳学周等, 2014b)。
2.3 性腺组织功能基因 2.3.1 芳香化酶(Aromatase)基因芳香化酶是类固醇激素代谢中的重要酶类，是鱼体性腺和脑中雌雄激素合成的关键酶，参与繁殖周期调控。已有研究表明，Aromatase调节神经内分泌和繁殖功能，并参与鱼类早期性别分化(Uno et al, 2012; Xiong et al, 2015)。它的基因包括CYP19/CYP17二类基因，各包含2种亚型，CYP19a/CYP19b和P450c17-Ⅰ/P450c17-Ⅱ。
对条斑星鲽CYP19a基因的研究发现，其主要在脑、卵巢和精巢中表达，表明其参与繁殖调控；CYP19a基因在Ⅱ期、Ⅲ期精巢中表达较高，在Ⅴ期精巢中表达最低，是因为精巢发育早期的鱼正处在性腺发育期，此时，需要CYP19a基因刺激雌二醇大量生成，从而促进精巢中精子发生和发育(金国雄等, 2010)。对牙鲆的研究中发现，P450c17-Ⅰ mRNA在心脏、精巢和卵巢表达丰富，P450c17-ⅡmRNA在脑、头肾、肾、精巢和卵巢表达丰富，表明其在繁殖相关组织中参与性类固醇激素生物合成；在精巢不同发育阶段均检测到P450c17-Ⅰ和P450c17-Ⅱ mRNA表达，并且这2种基因的表达水平变化与血浆中T水平和性腺指数变化相关，认为这2种基因通过参与调控性类固醇激素生成，进而参与调节精子发生和成熟(史宝，2010)2)；雌性牙鲆CYP19a基因调控区甲基化，可能导致芳香化酶的表达量降低，从而影响牙鲆繁殖内分泌过程(何峰等, 2011)。在半滑舌鳎研究中发现，P450c17-Ⅰ主要在性腺内表达，P450c17-Ⅱ主要在性腺、头肾、脑中表达；而在半滑舌鳎卵巢不同发育阶段，卵巢及脑中P450c17-Ⅰ和P450c17-Ⅱ基因表达变化趋势与卵巢发育正相关(Chen et al, 2009、2013)。
2) Shi B. Study on the molecular mechanisms of reproductive endocrinology in Paralichthys olivaceus and Paralichthys lethostigma. Doctoral Dissertation of Ocean University of China. 2010, 1-181[史宝.牙鲆繁殖内分泌分子机理研究.中国海洋大学博士研究生学位论文, 2010, 1-181]
2.3.2 雌激素受体(ER)和雄激素受体(AR)各包含2种亚型基因。雌激素受体包括ERα和ERβ 2种亚型(Coumailleau et al, 2015)，雄激素受体有ARα和ARβ 2种存在亚型(Schulz et al, 2010)。雌、雄激素受体必须结合雌、雄激素，从而实现对HPG轴的调控和反馈调节功能(Melo et al, 2015)。
在牙鲆雌激素受体β基因(ERβ)中发现2个单核苷酸多态性位点(SNP)，研究表明，SNP1与雌性牙鲆性腺指数相关，SNP2与雌性牙鲆的雌二醇水平和性腺指数相关。在SNP2位点，AB基因型个体比AA基因型个体具有较高的雌激素水平和性腺指数(Shi et al, 2009a)。FOXL2基因具有参与卵巢发育、滤泡细胞分化和维持卵巢生理功能的作用。对牙鲆FOXL2基因突变位点SNP1对牙鲆性腺指数效应均达到显著水平(Shi et al, 2009b)。牙鲆卵巢和精巢转录组数据注释结果表明，雌激素通过雌激素受体ER基因信号通路参与牙鲆性别决定和性腺发育(Fan et al, 2014)。半滑舌鳎雄激素受体AR基因组织表达分析表明，AR基因在半滑舌鳎的性腺、肝和脑等11种组织中均有表达，表明其广泛参与调控雄激素生理功能(温海深等, 2009)。
2.3.3 促滤泡激素受体(FSHR)和促黄体激素受体(LHR)FSHR和LHR介导相应促滤泡激素和促黄体激素，通过激活cAMP等信号通路，参与生殖调控。FSHR主要在卵巢的颗粒细胞层和精巢的谢尔托里氏细胞中表达，参与配子发育(Themmen et al, 2000；Cahoreau et al, 2015)。LHR主要定位在成熟的卵母细胞中的滤泡细胞和颗粒细胞内，调控孕激素介导的生殖细胞成熟(Andersson et al, 2013)。
半滑舌鳎促滤泡激素受体FSHR基因组织表达广泛，并在卵巢和精巢中大量表达；从繁殖周期来看，卵巢各发育期中FSHR mRNA逐渐升高，在产卵成熟期时表达最高，表明其与卵母细胞的成熟能力和排卵有关(陈晓燕等，2010)。大菱鲆促黄体激素受体LHR基因组织表达也较广泛，以卵巢中的表达最高，表明LHR基因促进了大菱鲆卵巢的发育和排卵行为(贾玉东等, 2014)。
2.3.4 膜孕激素受体家族(mPRs)基因mPRs主要作用是介导孕激素在繁殖周期中调控配子发育，膜孕激素受体结合孕激素进而激活成熟促进因子(MPF)促使卵母细胞成熟。膜孕激素受体在脑中还可介导GnRH生殖信号的产生，参与生殖轴的调控。另外，可诱导精子顶体反应，促进精子活力(Nagahama et al, 2008)。近年来研究发现，膜孕激素受体存在mPRα、mPRβ、mPRg 3种亚型，在已研究的近10种鱼类中，mPRα基因在多种鱼类中获得，而获得mPRβ、mPRg基因的鱼种较少(Kazeto et al, 2005; Uno et al, 2012; 柳学周等, 2015; 史宝, 20101))。
1) Shi B. Study on the molecular mechanisms of reproductive endocrinology in Paralichthys olivaceus and Paralichthys lethostigma. Doctoral Dissertation of Ocean University of China. 2010, 1-181 [史宝.牙鲆繁殖内分泌分子机理研究.中国海洋大学博士研究生学位论文, 2010, 1-181]
对鲆鲽类膜孕激素受体研究中，获得了牙鲆和半滑舌鳎mPRα基因，未发现mPRβ、mPRg基因。牙鲆和半滑舌鳎mPRα基因在脑和卵巢中高量表达，垂体组织表达也较高；表明其通过中枢神经作用于性腺，促进卵巢发育。在不同性腺发育期，mPRα基因在脑、性腺、垂体组织中的表达随着性腺发育而增高，在成熟期的Ⅴ期时达到高值，证实其通过HPG轴的协同作用介导孕激素推动卵巢发育进程(史宝等, 2013; 李晓晓, 20132))。
2) Li XX. Study on the physiological function of membrane progestin receptor in the reproductive cycle of flatfish. Master's Thesis of Shanghai Ocean University, 2013 [李晓晓.膜孕激素受体在鲆鲽类繁殖周期中的生理功能研究.上海海洋大学硕士研究生学位论文, 2013]
最近，在牙鲆和半滑舌鳎中发现了一种新型膜孕激素受体基因(mPRL)，该基因结构与mPRα、mPRβ、mPRg 3种亚型不同，跨膜区域和蛋白结合位点均有差异，与其他膜孕激素受体家族基因相似度也存在较大区别，并且不在一个进化分支。研究发现，mPRL基因与mPRα基因不同，其在卵巢的表达远远高于在脑、垂体、肝脏等组织中的表达，预示其主要围绕性腺发挥其生理功能。在不同发育阶段的卵母细胞中，mPRL基因表达水平从Ⅱ时相卵母细胞到Ⅴ时相卵母细胞逐渐升高；在繁殖周期的卵巢组织中，mPRL基因的表达水平从性腺发育Ⅱ期到Ⅴ期也是逐渐升高，与不同发育阶段血清中孕激素和促黄体激素变化趋势相吻合，由此可见，mPRL基因在半滑舌鳎卵母细胞成熟过程中具有重要的生理功能，与LHβ基因协同作用促进卵母细胞成熟(柳学周等, 2015; Shi et al, 2016)。
2.3.5 类胰岛素生长因子(IGFs)IGFs是鱼类生长发育的重要功能基因，最近，已有研究证实了IGFs在鱼类生殖调控中也发挥重要作用。IGFs mRNA和蛋白在硬骨鱼类的精原细胞、精母细胞、支持细胞及间质细胞中均有发现，表明IGFs参与了性腺的发育调节(Caruso et al, 2011)。
在星突江鲽(Platichthys stellatus)克隆了生长相关的IGF-I和IGF-Ⅱ基因，发现这2个基因在不同发育期的卵巢中表达水平随卵巢发育过程而逐渐升高，在Ⅴ期和Ⅵ期时显著表达，与血浆中睾酮(T)、雌二醇(E2)水平随卵巢发育逐渐升高的现象相一致，认为IGF-I和IGF-Ⅱ可能通过自分泌和旁分泌等途径参与到卵巢发育调控过程(臧坤, 2014)1)。
1) Zang K. Study on physiological function and in vitro recombinant expression of growth hormone and insulin-like growth factors from Platichthys stellatus. Master's Thesis of Shanghai Ocean University, 2014 [臧坤.星突江鲽生长激素和胰岛素样生长因子的生理功能及体外重组研究.上海海洋大学硕士研究生学位论文, 2014]
3 鲆鲽类生殖生理学研究进展采用HE、Jafri、HA、Mallory和PAS染色法，结合免疫组织化学方法研究了石鲽(Platichthys bicoloratus)和条斑星鲽(Verasper moseri)垂体组织结构，其脑垂体由神经垂体和腺垂体两部分组成，鉴别和定位神经垂体为一束神经纤维，中间夹杂1种垂体细胞和1种胶质；前腺垂体内含有催乳激素分泌细胞、促肾上腺皮质激素分泌细胞和促甲状腺激素分泌细胞；中腺垂体存有生长激素分泌细胞、促甲状腺激素分泌细胞和促性腺激素分泌细胞；后腺垂体内含有1种促黑色素激素分泌细胞(温海深等, 2007; 倪娜等, 2012)。
半滑舌鳎和圆斑星鲽性腺发育规律和特征研究表明，卵巢发育经历6个时期，相应的卵母细胞也分为6个时相；Ⅲ期、Ⅳ期为性腺快速发育期，Ⅴ期为产卵期，产卵后进入Ⅵ期并恢复到Ⅱ期；性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)在亲鱼的年周期发育中呈现规律性的变化，与卵巢发育密切关联；在Ⅴ期时，GSI达到最高峰，产卵后，GSI显著下降，此时，HSI显著升高至峰值，为下次性腺发育储备能量(柳学周等, 2009; 陈彩芳等, 2010)。
半滑舌鳎、圆斑星鲽、条斑星鲽和石鲽精巢属于小叶型，生殖细胞经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子5个发育阶段。其中，半滑舌鳎精巢前端有贮精囊；半滑舌鳎、条斑星鲽、星突江鲽精子主要包括头部、中段和尾部3部分，属于简单的原始类型，其中，半滑舌鳎精子头部为杯状，U型细胞核，条斑星鲽、星突江鲽精子头部为圆形(吴莹莹等, 2007; 温海深等, 2010; 徐永江等, 2010、2012; 李春广等, 2012)。
在人工养殖条件下，半滑舌鳎和圆斑星鲽雌性亲鱼血浆性类固醇激素年周期变化及其与卵巢发育成熟及温光调控的关系表明，亲鱼血浆中E2在产卵期达峰值；排卵结束后，E2表达水平降低。血浆中T含量在产卵期间保持高表达水平。血浆E2水平与GSI和HSI值的变化都呈现显著的正相关关系。水温和光周期对卵巢发育具有明显的影响，并显著影响E2的表达，GSI与水温存在显著的负相关关系，HSI与水温呈显著负相关，而CF与光周期呈现显著的负相关(徐永江等, 2011a、b)。而在人工养殖条件下，条斑星鲽雄性亲鱼血浆中T水平在繁殖季节达到峰值，其后显著下降并在其后的月份保持较低水平(李春广等, 2012)。
注射外源激素鲑鱼(Oncorhynchus sp.)促性腺激素释放激素类似物和人绒毛膜促性腺激素，可有效提高条斑星鲽雄鱼精子质量(Melo et al, 2015)。外源激素诱导后，条斑星鲽精子质量明显提升，精液黏稠度大为降低，精液流动性和液化能力增强，精子激活率和快速激活率显著提高，快速活动时间和精子寿命延长。同时，血浆中T和E2表达水平明显升高，在96 h时达到峰值。注射外源激素鲑鱼促性腺激素释放激素(GnRH)对2龄圆斑星鲽雌鱼卵巢发育具有一定的诱导效果。注射GnRH后，有约30%实验鱼的卵巢部位可见相对明显的隆起，其卵母细胞可达到Ⅴ时相早期，表明GnRH诱导了卵母细胞发育成熟过程(徐永江等, 2012、2013)。
野生褐牙鲆(Paralichtys olivaceus)亲鱼在性腺发育不同阶段卵巢的脂肪和脂肪酸组成的分析结果表明，多不饱和脂肪酸PUFA与牙鲆亲鱼的性腺发育关系较为密切，多不饱和脂肪酸为牙鲆亲鱼正常的繁殖所必需，在亲鱼培育过程中，需要补充含有适量高不饱和脂肪酸(王际英等, 2011)。
4 讨论与展望 4.1 新型生殖功能基因挖掘鱼类生殖是多个基因综合调控的过程，目前，已研究有限的生殖相关功能基因尚不能全面、精准地揭示生殖过程的调控机制。因此，新的生殖功能基因的发掘逐步受到关注。在高等脊椎动物中，报道的大量生殖调控基因，有许多仍没有在鱼类中鉴别到。近年来，半滑舌鳎、大黄鱼(Larimichthys crocea)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)等全基因组相继公布，为功能基因的挖掘提供了便利条件。伴随着研究手段和方法的更新，为筛选新的鱼类生殖过程关键作用基因、解析其调控通路带来了新的突破口。
4.2 生殖功能基因与环境的互作关系鱼类生殖是由外界温光等环境因子和内源因子共同调控下完成的。目前，对于鲆鲽类生殖内分泌研究已获得了一批相关功能基因，了解了其作用机制，但是这些功能基因与光照、水温、营养等环境之间是何种相互作用关系尚不明了。因此，探明各生殖相关功能基因在不同环境条件下的作用原理，阐明环境因子对功能基因的调控途径，摸清环境调控生殖过程中各种繁殖基因的表达变化，构建不同环境条件调控功能基因表达和性腺发育互作关系，是今后建立生殖精准调控技术的重要研究内容。
4.3 基因调控网络国际上，基于生物信息学、高通量测序技术、功能基因组学、蛋白质组学等现代生物技术的生物性状的基因网络调控或组学调控机制研究成为当前的研究热点，并不断改变着人们对鱼类HPG轴的认识。已有研究证明，鱼类生殖过程受到众多基因的作用(Ma et al, 2015)，同时，某些基因对多个不同性状都具有调控作用，说明鱼类的生殖涉及到多基因、多通路的分子功能网络的相互作用，如生长、体色关键基因GH、IGFs、POMC等都参与了鱼类生殖细胞发育和成熟的调控过程，并通过自分泌或旁分泌等多层次通路起作用，想通过单一基因的研究而形成对生殖过程全局调控机制的认识是非常困难的(Xu et al, 2016; 刘芝亮, 20131); 顾源, 20112))。因此，针对多基因生殖性状相关的“分子群”探索生殖过程的组合式网络调控通路，通过生物信息学和大数据分析，进一步揭示众多功能基因在生殖调控中的互作机制以及基因间的互作网络关系或网络系统应成为今后重要研究方向。
1) Liu ZL. Studies on key genes along grow axis from Cynoglossus semilaevis Günther: in vitro recombinant expression and role in growth and reproduction regulation. Master's Thesis of Shanghai Ocean University, 2013 [刘芝亮.半滑舌鳎生长轴关键基因的重组表达及对生长与生殖的调控机制研究.上海海洋大学硕士研究生学位论文, 2013]
2) Gu Y. Expression, antibody production of IGF-3 and its possible receptor characterization in Nile tilapia. Master's Thesis of Southwest University, 2011 [顾源.尼罗罗非鱼IGF-3蛋白表达、抗体制备及其可能受体的初步研究.西南大学硕士研究生学位论文, 2011]
4.4 功能基因产品的开发目前，有关鱼类功能基因作用机制和调控技术研究不断深入，对于生殖相关重要功能基因进行体外重组技术研究已逐渐开展，采用原核、真核表达系统获得基因重组蛋白产物，通过规模化发酵技术，进行重组蛋白产物的大规模制备，并采用在体和离体实验进行功能基因产品的生物学活性分析及功能验证；同时，分析不同基因产物组合配伍效果及其在HPG轴不同层次上的促熟催产效果，从而探索出高效鱼类催产剂的制备方法，并加以推广应用，保障鱼类的健康繁殖，建立精准的繁育体系，这也是下一步研究的重要课题。
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