上皮囊肿病是由隶属于衣原体目 (Chlamydiales) 的细菌引起的一种鱼类传染病，在世界范围内流行。最早关于该病的报道始于1920年，至今上皮囊肿病已在全世界90余种海水、淡水野生和养殖鱼类中被发现 (Stride et al, 2014)。该病的典型特征是病鱼的鳃、表皮等组织的上皮细胞因衣原体寄生而增生、肥大，最后形成囊肿，严重影响鱼体的呼吸功能和气体交换。鱼类上皮囊肿病发病速率较慢，发病初期不易被发现。后期病鱼呼吸困难，代谢机能紊乱，会陆续死亡，死亡率最高可达100% (Katharios et al, 2008)。国内尚未有关于鱼类上皮囊肿病的研究报道。

衣原体是绝大多数鱼类上皮囊肿病的病原，为严格的细胞内寄生细菌，革兰氏染色阴性 (Draghi et al, 2007)，目前尚无法在体外培养 (Stride et al, 2014)。该病原主要侵染鱼体的鳃和表皮的上皮细胞，在宿主细胞质内不断分裂增殖，形成一个大包涵体。被衣原体感染的鱼体上皮组织除出现囊肿外，还表现为发炎、细胞坏死、分泌黏液增多等病理现象。近年来，通过16S rDNA序列比对分析，确定这些衣原体均隶属于衣原体目，但分属于不同的科和属 (Stride et al, 2014)。

斑石鲷 (Oplegnathus puncatus) 在分类上属于鲈形目 (Perciformes)、石鲷科 (Oplegnathidae)、石鲷属，为温热带近海鱼类，主要分布于我国黄海、东海、南海和日本、韩国等海域。斑石鲷生长速度快，饵料转化率高，肉质鲜美，是优质的可食用海水鱼类。2014年，斑石鲷在我国规模化人工繁育成功，成为有发展潜力的海水养殖鱼类新品种。国内外已报道的斑石鲷病害不多，主要有虹彩病毒感染、病毒性神经坏死病、黏孢子虫病等 (Skliris et al, 2001; Yanagida et al, 2008; Dong et al, 2010)。此外，日本学者曾在25日龄的斑石鲷仔鱼 (全长为9–12 mm) 中发现过疑似上皮囊肿病的病例，但未进行更深入的研究 (Egusa et al, 1987)。2015年，某养殖场的斑石鲷幼鱼陆续发病死亡，15 d内累积死亡率达40%以上，造成了较大的经济损失。本研究通过对疾病的现场调查、病鱼的临床检查、病理组织的光学显微镜和扫描电子显微镜观察，将该病初步确定为斑石鲷上皮囊肿病。这是上皮囊肿病在中国养殖斑石鲷中首次被发现和记载。

在养殖场调查并记录疾病发生时养殖池海水的温度、盐度，病鱼大小、养殖密度、死亡特征等信息。观察病鱼的游泳、呼吸、摄食等状态。取濒死的病鱼，进行外观检查和剖检，观察、记录各器官病变情况。剪取病鱼鳃丝制成水浸片，置于光学显微镜下观察。

剪取濒死的斑石鲷幼鱼鳃丝，迅速放入Davidson’s AFA固定液中。固定后进行常规石蜡切片和苏木精–伊红染色，用光学显微镜观察鳃组织的病变情况。同时，取病鱼的鳃丝，用解剖刀切成1–2 mm³的小块，置于多聚甲醛–戊二醛固定液中固定，然后经脱水、临界点干燥、真空镀膜等处理，制成扫描电子显微镜样品，使用日本电子公司JSM-840型扫描电子显微镜观察、拍照。

2015年初，某养殖场40个斑石鲷幼鱼养殖池中，有9个养殖池发病。此时养殖池的水温为21℃，盐度为30。病鱼全长约为15 cm，养殖密度为70–80尾/m³水体。起初各发病池每天只有数尾鱼死亡，但随着病程的延长，每天的死鱼数量逐渐增加，15 d内累积死亡率达40%以上。患病幼鱼鱼群散开、不聚集。病鱼在水池中活力差，身体侧偏，常静止于水底或侧壁，严重者随着水流漂流。但病鱼反应灵敏，难以捕捉。病鱼的典型症状是呼吸困难，口部持续张开，鳃盖开合频繁，对投喂的食物无反应。外观检查可见病鱼体表无明显损伤或溃疡，但鳃部覆盖有大量黏液，鳃丝残缺，颜色鲜红 (图 1)。剖检发现，病鱼肝、脾、肾等内脏表观正常，无明显病变。肠道无肿胀积水现象，但其中无食物。

图 1(Fig. 1)

图 1 患上皮囊肿病斑石鲷幼鱼的鳃 Figure 1 Epitheliocystis-infected gills of juvenile O. puncatus

取病鱼鳃丝制成水浸片，置于相差显微镜下观察，可见鳃丝末端有许多大小不一的包囊，直径约为30–70 μm，平均直径约为50 μm (图 2-A)。在普通光学显微镜下，这些包囊大量附着在鳃丝上，外观圆形或卵圆形，呈浅黄棕色，少数包囊已从鳃丝上脱落 (图 2-B)。在苏木精–伊红染色的石蜡切片中，患病斑石鲷的鳃丝病变严重，鳃丝末端的许多上皮细胞膨大呈囊肿状，部分上皮细胞坏死、脱落 (图 3-A)。次级鳃丝粘连，呈棍棒化。囊肿嗜碱性，内部均质化 (图 3-B)。通过扫描电子显微镜观察患病斑石鲷的鳃丝，可发现鳃丝棍棒化，鳃小片被大量黏液覆盖，有许多大小不一的囊肿细胞镶嵌于鳃小片之间 (图 4-A)，只露出光滑的上表面 (图 4-B)。

图 1(Fig. 1)

图 2 患上皮囊肿病的斑石鲷鳃丝上附着的包囊 Figure 2 Cysts attached to the epitheliocystis-infected gill of O. puncatus A：鳃丝末端大小不一的包囊；B：圆形或卵圆形的呈浅黄棕色的包囊 A: Cysts of different sizes at the end of gill filaments; B: Round or ovoid cysts with light yellow-brown color

图 1(Fig. 1)

图 3 病鱼鳃丝末端呈囊肿状的上皮细胞 Figure 3 Enlarged epithelial cells (cysts) in the end of secondary lamellae A：次级鳃丝末端粘连；B：囊肿嗜碱性且内部均质化 A: The ends of secondary lamellae adhered each other; B: The cysts were basophilia and homogeneous

图 1(Fig. 1)

图 4 扫描电子显微镜下患病斑石鲷幼鱼的鳃丝及包囊 Figure 4 Scanning electron micrographs of gill filament and cyst in epitheliocystis-infected O. puncatus A：棍棒化的鳃丝及镶嵌着上皮囊肿细胞的鳃小片；B：表面光滑的上皮囊肿细胞 A: Clavate gill filament and cysts embedding secondary lamellae; B: A cyst with smooth surface

文献报道，鱼类上皮囊肿病的主要症状包括病鱼游泳无力、在水中停滞，呼吸困难、常在水面处呼吸，食欲下降，鳃丝分泌出大量黏液，鳃丝和体表有大量的白色或淡黄色的包囊 (Nylund et al, 1998; Draghi et al, 2007; Mitchell et al, 2011)。上皮囊肿病病原体在在大西洋鲑 (Salmo salar) 鳃上皮细胞内增殖，形成包囊并不断变大，最后导致鳃小片相互粘连，鳃上皮细胞坏死、脱落，严重影响了病鱼的呼吸功能 (Nylund et al, 1998; Draghi et al, 2004)。与上述报道相类似，本研究的调查和观察结果也表明，斑石鲷上皮囊肿病的病灶主要是鳃。囊肿的不断增大，引起鳃丝上皮细胞坏死，也刺激鱼体产生应激反应，导致鳃丝分泌大量黏液。鳃丝的病变严重影响了鱼体气体交换，因此病鱼表现出严重的缺氧症状。此外，感染上皮囊肿病的斑石鲷幼鱼，15 d内的累积死亡率超过40%，该数值与北极红点鲑 (Salvelinus alpinus) 最高44%的累积死亡率相当，但低于尖吻重牙鲷 (Diplodus puntazzo) 仔鱼100%的死亡率 (Draghi et al, 2007; Katharios et al, 2008)。这说明与仔鱼相比，幼鱼对该病具有更强的抵抗力，因此发病初期症状不明显，发病后仍然能够存活较长时间，其特征表现为慢性死亡。因此，通过疾病的现场调查、病鱼的临床检查、病理组织的光学显微镜和扫描电子显微镜观察，可以初步确定此次斑石鲷幼鱼罹患了上皮囊肿病。

感染不同鱼类的上皮囊肿病，其病原菌株差异较大。但通过16S rDNA序列分析发现，绝大部分菌株隶属于衣原体目，分属于不同的科、属 (Stride et al, 2014)。在今后的研究中，可以通过测定斑石鲷上皮囊肿病病原的16S rDNA序列，最终确定该病原的分类地位，并研发病原特异性的分子生物学检测技术，对该病进行早期诊断。

作为新兴的海水鱼类养殖品种，斑石鲷的病害少有报道。感染上皮囊肿病的斑石鲷幼鱼虽然表现为慢性死亡，但如果不及时采取治疗措施，累积死亡率仍然很高，导致较大的经济损失。养殖场曾尝试使用甲醛和硫酸铜对病鱼进行药浴，但没有治疗效果。曾有文献报道，土霉素对大口黑鲈 (Micropterus salmoides) 上皮囊肿病有较好的治疗效果 (Goodwin et al, 2005)，但其是否适合治疗斑石鲷上皮囊肿病，仍需进一步研究。