近几年，国内外鱼粉供应紧张，需求不断上涨，鱼粉价格攀高，导致养殖成本不断上升，严重制约了水产养殖业的发展，寻找合适的蛋白源替代鱼粉是解决目前鱼粉短缺问题的有效途径。研究表明，用价格低廉的动植物蛋白源替代部分鱼粉是解决这一问题的有效措施(Lim et al, 2011; Suloma et al, 2014; 梅琳等, 2015)。但是，植物蛋白源存在影响饲料适口性、含有抗营养因子、氨基酸不平衡等问题，导致养殖鱼类尤其是肉食性鱼类对植物性蛋白源利用率很低；而动物蛋白源中脂肪的饱和度较高，影响了饲料的适口性，替代鱼粉的效果并不理想(艾庆辉等, 2005; 周歧存等, 2005; Kaushik et al, 2010; Lee, 2002)。

在大西洋鲑(Salmo salar)、欧洲鲈鱼(Dicentrarchus labrax)等研究中发现，饲料中添加适量鱼蛋白水解物，对鱼的生长及饲料利用有促进作用(Hevrøy et al, 2005; Kotzamanis et al, 2007)。Zheng等(2012)发现小分子量鱼蛋白水解物能显著提高牙鲆(Paralichthys olivaceus)幼鱼的特定生长率。猪血是一种非常重要的蛋白质资源，其红细胞的蛋白含量高达38%，占全血蛋白总量的75%以上，传统制备血粉氨基酸采用酸水解法，其缺点是反应剧烈，严重破坏氨基酸(如色氨酸、半胱氨酸和丝氨酸)。采用酶水解法可以充分将大分子蛋白质分解为多肽和部分游离氨基酸的蛋白水解物，不仅有效保留了猪血蛋白的营养特性，而且与猪血蛋白相比较，蛋白水解物相当于猪血经过预消化，更易被机体快速吸收(卢寅泉等, 1995; 余奕珂等, 2004)。豆粕中含有抗营养因子和高含量的碳水化合物，降低了水产动物对干物质和能量的消化吸收(Kaushik et al, 1995)。艾庆辉等(2005)发现豆粕经添加酶制剂可去除其中大部分抗营养因子、可溶性碳水化合物和粗纤维等。我国是啤酒生产大国，每年因为酿酒都会产生大量的废酵母泥，其蛋白质含量高，B族维生素和色素以及多糖(如葡聚糖等)含量丰富，开发和利用这些废弃资源具有重要的经济价值和现实意义(杨天骄等, 2008; Sanderson et al, 1994)。柳茜等(2015)发现，饲料中添加酵母水解物可提高大菱鲆(Scophalmus maximus)幼鱼机体免疫能力、肝脏抗氧化性能和抗应激能力。本研究以花鲈(Lateolabrax japonicus)幼鱼为对象，研究饲料中分别以鱼蛋白水解物(Fish protein hydrolysate, FPH)、猪血蛋白水解物(Pig blood protein hydrolysate, PBPH)、豆粕蛋白水解物(Soybean protein hydrolysate, SPH)、酵母蛋白水解物(Yeast protein hydrolysate, YPH)替代鱼粉(Fish meal, FM)，对其生长性能、饲料利用、体成分及非特异性免疫的影响，为蛋白水解物在花鲈饲料中的应用提供技术数据。

本研究以鳕鱼排、猪血粉、豆粕粉、啤酒酵母粉为原料，参考Zheng等(2012)的方法，采用双酶联合水解，调节pH为8.5-9.0，55℃水解5 h，冷却过滤后，离心得到水解液，浓缩干燥后，得到FPH、PBPH、SPH和YPH。置于-20℃冰箱，保存备用。

以鱼粉和豆粕为主要蛋白源，鱼油为主要脂肪源，高筋小麦粉为主要糖源，实验组饲料分别以鱼蛋白水解物、猪血蛋白水解物、豆粕蛋白水解物、酵母蛋白水解物替代配方中10%的鱼粉蛋白，即FPH组、PBPH组、SPH组和YPH组，30%鱼粉组设为对照组，即FM组，饲料配方和营养成分如表 1所示，实验饲料原料均粉碎过80目筛后，充分混匀，用饲料颗粒机加工制成直径为3 mm的5种等氮等脂的配合饲料，55℃烘干，置于-20℃冰箱中保存备用。

表 1(Tab. 1)

表 1 实验饲料配方和营养组成 Table 1 Formulation and proximate chemical composition of experimental diets (%) 原料Ingredient 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 鱼粉Fish meal (FM) 30 20 20 20 20 鱼蛋白水解物Fish protein hydrolysate (FPH)1 8.5 猪血蛋白水解物Pig blood protein hydrolysate (PBPH)2 7 豆粕蛋白水解物Soybean protein hydrolysate (SPH)3 12.5 酵母蛋白水解物Yeast protein hydrolysate (YPH)4 14.5 豆粕Soybean meal 13 13 13 13 13 谷朊粉Wheat gluten meal 9 9 9 9 9 玉米蛋白粉Corn gluten meal 12 12 12 12 12 高筋小麦粉High-gluten wheat flour 21.4 21.9 23.4 17.9 15.9 磷脂Phospholipid 1 1 1 1 1 胆碱Choline chloride 1 1 1 1 1 鱼油Fish oil 7.5 8.5 8.5 8.5 8.5 维生素混合物Vitamin premix5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 矿物质混合物Mineral premix6 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 磷酸二氢钙Ca(H2PO4)2 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 维生素C Vitamin C 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 抗氧化剂Ethoxyquin 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 营养组成Nutrition composition 水分Moisture 5.80 5.45 5.07 5.15 5.23 粗蛋白Crude protein 46.53 46.65 46.82 46.41 46.72 粗脂肪Crude lipid 10.75 10.97 11.01 11.02 11.07 灰分Ash 10.41 9.41 8.73 10.36 10.63  1：鱼蛋白水解物：粗蛋白含量76.98%，粗脂肪含量0.18%，粗灰分含量10.76%；2：猪血蛋白水解物：粗蛋白含量89.18%，粗脂肪含量0.17%，粗灰分含量6.57%；3：豆粕蛋白水解物：粗蛋白含量58.18%，粗脂肪含量0.16%，粗灰分含量17.23%；4：酵母蛋白水解物：粗蛋白含量52.37%，粗脂肪含量0.18%，粗灰分含量10.76%；5：维生素混合物(mg/kg or g/kg饲料)：硫胺素，25 mg；核黄素，45 mg；盐酸吡哆醇，20 mg；维生素B12，0.1 mg；维生素K3，10 mg；肌醇，800 mg；泛酸，60 mg；烟酸，200 mg；叶酸，20 mg；生物素，1.20 mg；维生素A，32 mg；维生素D，5 mg；维生素E，120 mg；次粉18.67 g；6：矿物质混合物(mg/kg or g/kg饲料)：氟化钠，2 mg；碘化钾，0.8 mg；氯化钴，50 mg；硫酸铜，10 mg；硫酸亚铁，80 mg；硫酸锌，50 mg；硫酸镁，1200 mg；磷酸二氢钙，3000 mg；氯化纳，100 mg；沸石粉，15.51 g  1: FPH, with 76.98% crude protein, 0.18% crude lipid, 10.76% crude ash; 2: PBPH, with 89.18% crude protein, 0.17% crude lipid, 6.57% crude ash; 3: SPH, with 58.18% crude protein, 0.16% crude lipid, 17.23% crude ash; 4: YPH, with 52.37% crude protein, 0.18% crude lipid, 10.76% crude ash; 5: Vitamin premix (mg/kg or g/kg diet): Thiamine 25 mg, Riboflavin 45 mg, Pyridoxine 20 mg, Vitamin B12 0.1 mg, Menadione 10 mg, Inositol 800 mg, Pantothenate 60 mg, Tocopherol acetate 200 mg, Folic acid 20 mg, Biotin 1.2 mg, Vitamin A 32 mg, Vitamin D 5 mg, Vitamin E 120 mg, Wheat flour 18.67 g; 6: Mineral premix (mg/kg or g/kg) diet: NaF 2 mg; KI 0.8 mg; CoCl2·6H2O 50 mg; CuSO4·5H2O 10 mg; FeSO4·7H2O 80 mg; ZnSO4·7H2O 50 mg; MnSO4·4H2O 1200 mg; Ca(H2PO4)2·H2O 3000 mg; NaCl 100 mg; Mordenzeo 15.51 g

表 1 实验饲料配方和营养组成 Table 1 Formulation and proximate chemical composition of experimental diets (%)

实验在浙江省宁波市象山港湾水产苗种有限公司海水浮式网箱中进行。实验花鲈在海水网箱(3.0 m× 3.0 m×3.0 m)中先暂养1周，使其适应海域水体的变化和饲料的投喂频率。实验鱼在海水浮式网箱(1.5 m× 1.5 m×2.0 m)中养殖，实验鱼初始平均体重为31.99 g，每个网箱放养30尾，每个处理组3个重复。实验期间，每天投喂2次(06:00和18:00) 至表观饱食，养殖周期为8周。生长实验开始时，实验鱼饥饿24 h，随机选取体质健康、规格均匀的实验鱼，称重后随机放入实验网箱，并随机分组。实验期间，采用自然光照，每天测定水温和pH，每周测定水体盐度、溶氧和氨氮。海水温度为28-29.5℃，盐度为30左右，pH值为7.2-7.5，溶解氧含量约7 mg/L，氨氮 < 0.5 mg/L。

实验开始时，随机取5尾鱼称重，保存于-20℃冰箱，供后续分析鱼体生化成分。生长实验结束后，将实验鱼饥饿24 h后从网箱中捞出，称取每个网箱中花鲈体重，记录对应网箱中实验鱼尾数和终末总重，计算存活率和增重率；然后用丁香酚(1:10000) 麻醉，从每个处理组随机取出6尾鱼，测量体长体重，计算肥满度，同时对应每尾鱼解剖得到内脏团和肝脏，分别称重，用于计算肝体比和脏体比；每处理组另取6尾鱼，用1 ml一次性无菌注射器自尾静脉取血，解剖取肝脏，血样在4℃静置4 h后，4℃条件下4000 r/min离心10 min，吸取上层血清，上层血清与肝脏-80℃保存待测；从每个网箱随机取5尾实验鱼，保存于-20℃，用于鱼体常规成分分析。

饲料和全鱼样品在105℃烘干至恒重，通过失重法测定干物质含量，然后进行生化测定。粗蛋白采用凯氏定氮法测得(凯氏定氮仪VELP UDK142, 意大利)；粗脂肪采用索氏提取法测得(索氏抽提仪SOXTEC^TM2050, 丹麦)；灰分测定：先将样品炭化至无烟，然后放入马福炉中550℃燃烧6 h，失重法测定灰分含量；饲料中氨基酸的含量测定：样品均经冷冻干燥(冷冻干燥机FDU-1100，日本) 24 h后，采用氨基酸分析仪(日立L-8900型，日本)测得；血清和肝脏中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和肝脏蛋白浓度均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒检测(Tecan Infinite M200酶标仪，瑞士)，溶菌酶(LZM)采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒通过分光光度计检测。

表 2(Tab. 2)

表 2 实验饲料氨基酸组成(%干物质) Table 2 The amino acid composition of experimental diets (% dry matter) 氨基酸组成 Amino acid composition 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 必需氨基酸EAA 苏氨酸Thr 1.74 1.73 1.51 1.55 1.69 缬氨酸Val 2.18 2.19 2.38 1.91 2.13 蛋氨酸Met 0.75 0.79 0.60 0.78 0.93 异亮氨酸Ile 1.95 1.97 1.21 1.97 1.88 亮氨酸Leu 3.47 3.30 3.61 3.49 3.37 苯丙氨酸Phe 3.89 3.98 4.02 2.97 2.70 赖氨酸Lys 2.27 2.45 2.55 2.11 2.14 组氨酸His 1.08 0.98 1.21 0.97 1.16 精氨酸Arg 1.88 1.87 1.59 2.12 2.17 非必需氨基酸NEAA 天冬氨酸Asp 2.71 3.13 2.52 2.52 2.39 丝氨酸Ser 1.68 1.88 1.60 1.63 2.10 谷氨酸Glu 8.04 8.54 7.25 7.80 7.73 甘氨酸Gly 1.94 1.99 1.72 1.72 1.62 丙氨酸Ala 2.32 2.93 2.28 2.20 2.32 半胱氨酸Cys 0.60 0.59 0.55 0.61 0.65 酪氨酸Tyr 1.47 1.29 1.24 1.33 1.27 牛磺酸Tau 0.20 0.23 0.13 0.13 0.12 总氨基酸ΣAA 38.19 39.84 35.99 35.80 36.38 必需氨基酸总和ΣEAA 19.23 19.25 18.69 17.87 18.18 非必需氨基酸总和ΣNEAA 18.96 20.59 17.30 17.93 18.20 ΣEAA/ΣTAA (%) 50.34 48.32 51.93 49.92 49.97 ΣEAA/ΣNEAA (%) 101.39 93.50 108.03 99.67 99.87  EAA: Essential amino acids; NEAA: Non-essential amino acids; ΣAA: Total amino acids; ΣEAA: Sum of essential amino acids; ΣNEAA: Sum of non-essential amino acids

表 2 实验饲料氨基酸组成(%干物质) Table 2 The amino acid composition of experimental diets (% dry matter)

花鲈的成活率、增重率、特定生长率、摄食率、饲料效率、蛋白效率比、蛋白质沉积率、肝体比、脏体比和肥满度参考以下公式：

存活率(Survival rate, SR, %) = (N₀-N_t)/N₀×100

增重率(Weight gain rate, WGR, %)=100×(W_t-W₀)/W₀

特定生长率(Specific growth rate, SGR, %/d)= (lnW_t-lnW₀)/t×100

摄食率(Feed intake, FI, %/d)=W/[(W_t+W₀)/2×t]×100

饲料效率(Feed efficiency, FE)=(W_t-W₀)/W

蛋白效率比(Protein efficiency ratio, PER)=(W_t-W₀)/ (W×P)

蛋白质沉积率(Protein productive value, PPV, %)= (W_t×P_t-W₀×P₀)/(W×P)×100

肝体比(Hepatopancrea somatic index, HSI, %)=W_h/ W_d×100

脏体比(Viscerosomatic index, VSI, %)=W_v/W×100

肥满度(Condition factor, CF)=W_t/L³×100

式中，N₀和N_t分别为初始和死亡的鲈鱼尾数，W、W₀和W_t分别为每尾鱼摄食的饲料干物质重(g)、实验开始时鲈鱼的体重(g)和实验结束时花鲈的体重(g)，P、P₀和P_t表示饲料粗蛋白含量(干重%)，实验开始时鱼体粗蛋白含量(湿重%)和实验结束时鱼体粗蛋白含量(湿重%)，t表示养殖实验天数(d)。W_h为样品鱼肝脏重(g)，W_v为样品鱼内脏重(g)，W_d为样品鱼体重(g)，L为样品鱼体长(cm)。

各组实验数据，均采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析(One-way ANOVA)，若差异显著进行邓肯多重比较(Duncan’s multiple range tests)，P < 0.05被认为差异显著，所有数据均以平均值±标准误(Mean±SE)表示。

不同蛋白水解物对花鲈生长和饲料利用的影响见表 3。各处理组实验鱼存活率和摄食率没有显著差异(P > 0.05)，末期均重、增重率、特定生长率在FPH组和FM组最高，两组之间没有显著性差异(P > 0.05)，但显著高于PBPH组、SPH组和YPH组(P < 0.05)；FPH组饲料效率高于FM组、PBPH组和YPH组(P > 0.05)，且显著高于SPH组(P < 0.05)；FPH组蛋白效率比显著高于FM组、PBPH组、SPH组和YPH组(P < 0.05)；FPH组蛋白质沉积率高于FM组和PBPH组(P > 0.05)，且显著高于SPH组(P < 0.05)。

表 3(Tab. 3)

表 3 不同蛋白水解物对花鲈生长和饲料利用的影响(平均值±标准误) Table 3 Effects of different protein hydrolysates on the growth performance and feed utilization of L. japonicus (Mean±SE) 项目Items 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 初期均重 Initial body weight (g) 31.99±0.05 32.00±0.05 32.00±0.10 32.00±0.02 31.95±0.05 末期均重 Final body weight (g) 116.23±1.01b 118.79±1.65b 106.05±2.09a 104.82±1.74a 109.45±1.49a 增重率 Weight gain rate (%) 263.37±5.66b 271.14±8.58b 231.36±11.78a 227.53±8.53a 242.54±7.30a 特定生长率 Specific growth rate (%/d) 2.30±0.02b 2.34±0.02b 2.14±0.04a 2.12±0.03a 2.20±0.02a 存活率 Survival rate (%) 98.89±1.11 98.89±1.11 97.78±2.22 97.78±1.11 97.78±1.11 摄食率 Feed intake (%/d) 1.87±0.06 1.84±0.09 1.92±0.11 1.97±0.03 1.94±0.06 饲料效率 Feed efficiency 1.09±0.04ab 1.12±0.04b 1.00±0.09ab 0.97±0.01a 1.01±0.03ab 蛋白效率比 Protein efficiency ratio 2.34±0.08ab 2.39±0.09c 2.13±0.10a 2.09±0.01a 2.16±0.05ab 蛋白质沉积率 Protein productive value (%) 38.99±2.25c 37.96±1.50c 32.21±0.68ab 31.18±1.49a 36.59±1.35bc  注：同行数据中，相同上标字母表示差异不显著(P > 0.05)，下同  Note: Values in the same column with the same superscripts were not significantly different (P > 0.05), the same as below

表 3 不同蛋白水解物对花鲈生长和饲料利用的影响(平均值±标准误) Table 3 Effects of different protein hydrolysates on the growth performance and feed utilization of L. japonicus (Mean±SE)

各处理组花鲈鱼体中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分分析数据见表 4。花鲈鱼体水分含量在71.60 %-72.75%之间，粗蛋白含量在15.01%-16.57%之间，粗脂肪含量在5.74%-7.41%之间，灰分含量在4.27%-4.56%之间。各处理组花鲈鱼体中水分和灰分含量没有显著性差异(P > 0.05)；粗蛋白在FPH组高于FM组和YPH组，但差异不显著(P > 0.05)，在FPH组、FM组和YPH组显著高于SPH组(P < 0.05)；粗脂肪在FPH组低于PBPH组和SPH组，但没有显著性差异(P > 0.05)，在FPH组显著低于YPH组和FM组(P < 0.05)。

表 4(Tab. 4)

表 4 不同蛋白水解物对花鲈鱼体化学组成的影响(平均值±标准误) Table 4 Effects of different protein hydrolysates on the body chemical composition of L. japonicus (Mean±SE) 鱼体化学组成 Body chemical composition (%) 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 水分 Moisture 71.88±0.58 72.75±0.21 72.41±0.45 72.27±0.66 71.60±0.91 粗蛋白 Crude protein 16.27±0.35bc 16.57±0.20c 15.39±0.14ab 15.01±0.24a 16.19±0.44bc 粗脂肪 Crude lipid 7.41±0.11c 5.74±0.10a 6.51±0.26ab 6.28±0.35ab 7.00±0.27bc 灰分 Ash 4.41±0.21 4.51±0.17 4.46±0.08 4.56±0.05 4.27±0.04

表 4 不同蛋白水解物对花鲈鱼体化学组成的影响(平均值±标准误) Table 4 Effects of different protein hydrolysates on the body chemical composition of L. japonicus (Mean±SE)

不同蛋白水解物对花鲈形态指标的影响见表 5，脏体比在各组之间差异不显著(P > 0.05)；肝体比在FPH组低于PBPH组、FM组和YPH组，但没有显著性差异实验鱼体的氨基酸含量组成见表 6，亮氨酸含量在FPH组、YPH组、SPH组低于FM组(P > 0.05)，(P > 0.05)，在FPH组显著低于SPH组(P < 0.05)；肥满度在FPH组、FM组、YPH组和PBPH组没有显著性差异(P > 0.05)，但在FPH组、FM组和YPH组显著高于SPH组(P < 0.05)。但显著低于PBPH组(P < 0.05)；赖氨酸含量在FM组高于FPH组、YPH组(P > 0.05)，且显著高于SPH组、PBPH组(P < 0.05)；在鱼虾10种必需氨基酸中，除色氨酸未测定之外，鱼体中其他7种必需氨基酸均无显著性差异(P < 0.05)。

表 5(Tab. 5)

表 5 不同蛋白水解物对花鲈形态指标的影响(平均值±标准误) Table 5 Effects of different protein hydrolysates on the morphological indices of L. japonicus (Mean±SE) 形态指标 Morphological indices 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 脏体比 VSI (%) 9.60±0.82 8.99±0.52 9.52±0.35 9.97±0.37 9.62±0.58 肝体比 HSI (%) 1.56±0.14ab 1.29±0.36a 1.69±0.40ab 1.82±0.07b 1.56±0.08ab 肥满度 CF 1.49±0.04b 1.46±0.04b 1.42±0.06ab 1.34±0.10a 1.45±0.04b

表 5 不同蛋白水解物对花鲈形态指标的影响(平均值±标准误) Table 5 Effects of different protein hydrolysates on the morphological indices of L. japonicus (Mean±SE)

表 6(Tab. 6)

表 6 不同蛋白水解物对花鲈鱼体氨基酸组成的影响(%干物质)(平均值±标准误) Table 6 Effects of different protein hydrolysates on the amino acid composition of L. japonicus (% dry matter)(Mean±SE) 氨基酸组成Amino acid composition 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 必需氨基酸 EAA 苏氨酸 Thr 2.51±0.04 2.34±0.21 2.16±0.10 2.19±0.11 2.29±0.12 缬氨酸 Val 2.46±0.04 2.24±0.21 2.08±0.09 2.08±0.08 2.18±0.12 蛋氨酸 Met 1.29±0.09 1.23±0.13 0.94±0.09 1.14±0.06 1.20±0.16 异亮氨酸 Ile 2.21±0.06 1.99±0.20 1.85±0.08 1.85±0.09 1.95±0.13 亮氨酸 Leu 3.83±0.07ab 3.57±0.07a 3.97±0.05b 3.63±0.09a 3.61±0.10a 苯丙氨酸 Phe 2.97±0.09 2.93±0.08 2.88±0.10 2.76±0.05 2.83±0.04 赖氨酸 Lys 4.57±0.09b 4.39±0.33ab 3.83±0.18a 3.81±0.18a 3.97±0.17ab 组氨酸 His 1.20±0.09 1.18±0.12 1.29±0.08 1.17±0.05 1.13±0.06 精氨酸 Arg 3.53±0.07 3.31±0.31 3.08±0.13 3.13±0.13 3.29±0.21 非必需氨基酸 NEAA 天冬氨酸 Asp 4.81±0.20 4.74±0.18 4.70±0.11 4.47±0.23 4.73±0.26 丝氨酸 Ser 2.42±0.01 2.29±0.19 2.09±0.08 2.15±0.12 2.33±0.20 谷氨酸 Glu 8.60±0.08b 7.90±0.20ab 7.28±0.36a 7.37±0.35a 7.77±0.41ab 甘氨酸 Gly 4.29±0.09 4.43±0.24 4.16±0.12 4.22±0.12 4.38±0.31 丙氨酸 Ala 3.71±0.02 3.55±0.29 3.31±0.10 3.33±0.13 3.54±0.23 半胱氨酸 Cys 0.43±0.03 0.39±0.02 0.38±0.01 0.39±0.02 0.39±0.01 酪氨酸 Tyr 1.87±0.01 1.68±0.17 1.59±0.08 1.60±0.09 1.60±0.07 牛磺酸 Tau 0.28±0.04 0.24±0.04 0.22±0.03 0.21±0.01 0.23±0.04 总氨基酸 ΣAA 50.98±0.14 48.39±2.16 45.80±1.16 45.50±1.70 47.43±2.14 必需氨基酸总和 ΣEAA 24.59±0.20b 23.18±1.28ab 22.08±0.57ab 21.77±0.72a 22.45±0.63ab 非必需氨基酸总和 ΣNEAA 26.39±0.05 25.21±0.91 23.72±0.62 23.73±0.99 24.97±1.53 ΣEAA/ΣTAA (%) 48.22±0.25 47.86±0.60 48.21±0.27 47.86±0.26 47.42±0.87 ΣEAA/ΣNEAA (%) 93.16±0.95 91.82±2.22 93.11±0.99 91.78±0.97 90.28±3.16

表 6 不同蛋白水解物对花鲈鱼体氨基酸组成的影响(%干物质)(平均值±标准误) Table 6 Effects of different protein hydrolysates on the amino acid composition of L. japonicus (% dry matter)(Mean±SE)

不同蛋白水解物对花鲈血清和肝脏中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的影响见表 7。在血清中，AKP、ACP、SOD、LZM活性和T-AOC在FPH组显著高于YPH组(P < 0.05)，在FPH组和YPH组显著高于FM组、PBPH组和SPH组(P < 0.05)；在肝脏中，AKP、ACP、SOD、LZM活性和T-AOC在FPH组显著高于YPH组(P < 0.05)，在FPH组和YPH组显著高于FM组、PBPH组和SPH组(P < 0.05)。

表 7(Tab. 7)

表 7 不同蛋白水解物对花鲈血清和肝脏中AKP、ACP、SOD、LZM活性和T-AOC的影响(平均值±标准误) Table 7 Effects of different sources of protein hydrolysates on activities of AKP, ACP, SOD, LZM and T-AOC in serum and liver of L. japonicus (Mean±SE) 指标Indices 组别Group FM FPH PBPH SPH YPH 血清Serum  碱性磷酸酶AKP (U/100 ml) 16.11±0.30b 23.99±0.22d 15.68±0.65b 11.29±0.28a 19.94±0.77c  酸性磷酸酶ACP (U/100 ml) 14.85±0.25b 24.66±0.27d 14.49±0.69b 12.14±0.58a 20.30±0.45c  超氧化物歧化酶SOD (U/ml) 0.94±0.01b 1.17±0.01d 0.93±0.01b 0.88±0.00a 1.01±0.01c  溶菌酶LZM (U/ml) 129.20±2.41b 149.87±1.41d 121.87±2.97ab 118.40±2.81a 141.20±3.27c  总抗氧化能力T-AOC (U/ml) 0.29±0.01b 0.37±0.02d 0.28±0.01b 0.24±0.01a 0.33±0.06c 肝脏Liver  碱性磷酸酶AKP (U/g prot) 68.57±0.99b 84.32±1.54d 60.18±1.26a 58.43±1.65a 74.74±1.35c  酸性磷酸酶ACP (U/g prot) 819.98±29.12b 1064.95±21.08d 811.48±3.80b 742.61±7.63a 943.77±17.50c  超氧化物歧化酶SOD (U/g prot) 22.39±0.65b 25.74±0.24d 21.23±0.12ab 19.98±0.47a 24.01±0.36c  溶菌酶LZM (U/mg prot) 452.80±7.63b 529.33±15.18d 437.07±6.27b 362.40±8.81a 495.47±6.86c  总抗氧化能力T-AOC (U/mg prot) 0.34±0.01b 0.41±0.01d 0.34±0.01b 0.31±0.01a 0.37±0.00c

表 7 不同蛋白水解物对花鲈血清和肝脏中AKP、ACP、SOD、LZM活性和T-AOC的影响(平均值±标准误) Table 7 Effects of different sources of protein hydrolysates on activities of AKP, ACP, SOD, LZM and T-AOC in serum and liver of L. japonicus (Mean±SE)

本研究表明，在生长方面，添加鱼蛋白水解物的FPH组末期均重和特定生长率与对照FM组无显著性差异(P > 0.05)，添加PBPH、SPH和YPH组的末期均重和特定生长率显著低于FM组(P < 0.05)。研究发现，与YPH和PBPH相比，FPH更有利于金头鲷(Sparus aurata)和欧洲鲈鱼幼鱼的生长(Gisbert et al, 2012; Skalli et al, 2014)，这与本研究结果基本一致，添加鱼蛋白水解物和酵母蛋白水解物组的生长效果优于添加猪血蛋白水解物和豆粕蛋白水解物组。在饲料利用率方面，添加鱼蛋白水解物的FPH组和添加酵母蛋白水解物的YPH组，在摄食率、饲料效率和蛋白质沉积率方面均与FM组无显著性差异(P > 0.05)，FPH组和YPH组的蛋白效率比显著高于FM组(P < 0.05)。施用晖等(1992)用PBPH替代鱼粉，肉鸭(0-6周龄)体增重、饲料效率可达到与鱼粉组相同水平。也有研究表明，猪血经酶解添加到饲料中，对仔猪的生长性能和蛋白质利用率无改善作用(郄文莉, 2007)。本研究中，添加鱼蛋白水解物和酵母蛋白水解物组的饲料利用效果要优于添加猪血蛋白水解物和豆粕蛋白水解物组。推测影响鱼体生长的主要原因可能是氨基酸平衡破坏，产生“水桶效应”，导致鱼体生长缓慢、蛋白质效率降低(窦秀丽, 2014)¹⁾。这一推测在鱼体氨基酸中得到部分证明，本研究鲈鱼摄食不同饲料引起显著变化的必需氨基酸主要为亮氨酸和赖氨酸，亮氨酸在PBPH组中含量最高，而在FPH组中含量最低，这一变化趋势与饲料中亮氨酸含量一致，表明饲料中亮氨酸的含量影响鱼体组织中亮氨酸的沉积。但是，赖氨酸在PBPH组饲料中含量最高，而鱼体中的亮氨酸含量显著低于FM组，尽管精氨酸在各处理组中没有显著差异，但在PBPH组中含量也是所有实验组中最低的，这表明PBPH替代10%鱼粉可能恰好使赖氨酸和精氨酸发生拮抗作用。这一结果在大菱鲆的研究中得到证实，代伟伟等(2015)在饲料中添加不同比例的赖氨酸(添加量0、1.19%和2.39%)和精氨酸(添加量0、0.9%和2.0%)后发现，当饲料中赖氨酸和精氨酸的添加量分别为2.39%和0.9% (即实际含量分别为3.45%和2.23%)时，产生显著的拮抗作用，使得肌肉中赖氨酸和亮氨酸显著低于其他处理组，但在不同添加量时，都没有发现显著的拮抗作用，因此，赖氨酸和精氨酸在特定的比例会产生拮抗作用。

1) Dou XL. The study on the optimum requirement of dietary valine, histidine and threonine of Japanese seabass, Lateolabrax japonicus in the middle and late growing stage. Master's Thesis of Dalian Ocean >University, 2014, 41-46 [窦秀丽.鲈鱼生长中后期缬氨酸、组氨酸和苏氨酸营养需求的研究.大连海洋大学硕士研究生学位论文, 2014, 41-46]

在本研究中，FPH组、YPH组肝脏和血清中的ACP、AKP、LZM、SOD活性和T-AOC显著高于FM组、PBPH组和SPH组(P < 0.05)。Liang等(2006)报道用添加不同水平的水解鱼蛋白饲料饲喂花鲈，发现花鲈幼鱼的LZM活性与对照组相比有显著提高，这与本研究是基本一致的，说明FPH和YPH可以增强肝脏和血清中ACP、AKP、LZM、SOD活性和T-AOC，提高机体对外源微生物侵染的防御能力，推测可能与水解过程中产生的生物活性肽有关。Gildberg等(1998)报道低水平多肽对提高大西洋鳕鱼(Gadus morhua)鱼苗的非特异性免疫有一定作用，水解过程中产生的生物活性肽具有免疫增强和抗菌性(Kotzamanis et al, 2007)；YPH在一定程度上能提高花鲈的免疫能力，除了生物活性肽影响之外，其丰富的核苷酸、B族维生素也具有提高机体免疫力和抗氧化能力的作用(许丹丹等, 2011; 周小秋, 2009¹⁾)。许丹丹等(2011)研究表明，饲料中添加酵母核苷酸可显著提高凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺AKP活性和T-AOC。周小秋(2009)¹⁾指出，B族维生素能够提高血清LZM和ACP活性，增强鱼类非特异性免疫能力。本研究中，添加猪血蛋白水解物和豆粕蛋白水解物的PBPH组和SPH组，在血清和肝脏中，ACP、AKP、LZM、SOD活性和T-AOC显著低于FPH组和YPH组。研究表明，酶解技术将猪血水解获得猪血多肽或游离氨基酸，猪血多肽具有抗氧化性、增强免疫功能活性等功能(董清平等, 2008)，有研究表明酶解猪血粉增强肉鸡抗病能力(周学文等, 1998)，而豆粕经酶解获得多肽及游离氨基酸等蛋白消化产物(Tsumura et al, 2005)，同时大豆多肽可以增强水产动物免疫力，具体表现在提高其成活率、调节动物免疫系统的功能(赵述淼等, 2003)，分析本研究中PBPH和SPH组的ACP、AKP、LZM、SOD活性和T-AOC表现较低，推测是因其生长效果不理想，从而抑制了非特异性免疫的表达效果。

1) Zhou XQ. Relationship progress of vitamin B with fish digestion and absorption, immune and antioxidant defense capacity. China Animal Husbandry and Veterinary Association 2009 Annual Conference Proceedings (volume one), 2009, 963 [周小秋. B族维生素与鱼类消化吸收、免疫和抗氧化防御能力的关系研究进展. 中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册), 2009, 963]

在本研究条件下，适量的4种不同蛋白水解物替代鱼粉后投喂鲈鱼幼鱼，综合生长性能、饲料利用、体成分及血清和肝脏非特异性免疫结果，鱼蛋白水解物替代鱼粉的效果最好，其次是酵母蛋白水解物、猪血蛋白水解物和豆粕蛋白水解物。