1992年，大菱鲆(Scophthalmus maximus)自英国引入我国，随着苗种繁育技术的突破和工厂化养殖模式的建立，推动了我国海水养殖业的第四次发展浪潮。2015年渔业统计年鉴显示，2014年我国鲆鲽鱼类产量达到了1.36×10⁵ t，其中，大菱鲆产量占了近80%。然而，随着养殖规模化和集约化的发展，大菱鲆病害已成为产业中的突出问题，是阻碍产业可持续发展的主要瓶颈之一。目前, 已报道的大菱鲆疾病达数10种，致病原包括病毒(大菱鲆疱疹病毒、虹彩病毒等)、细菌[(弧菌(Vibrio)、链球菌(Streptococcus sp.)、气单胞菌(Aeromonas sp.))]等、寄生虫[盾纤毛虫(Paralembus digitiformis)、微孢子虫(Tetramicra brevifilum)、波豆虫(Ichthyobodo sp.)]等。其中，大菱鲆腹水病发生频率高、致病力强、死亡率高，在大菱鲆苗期和养成期均可暴发，是危害大菱鲆健康养殖的主要病害(王印庚等, 2004)。该疾病的主要特征为发病前期病鱼腹部肿胀，行动迟缓，摄食能力减弱；严重时肛部红肿凸出，胃部和鳍部出血，内脏团萎缩使腹部凹陷，基本不摄食，死亡率达到80%以上。目前，有关大菱鲆腹水病致病原的报道中，未发现病毒和寄生虫，已确定的致病原为细菌性病原，主要包括鲨鱼弧菌(Vibrio carchariae)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi) (张正, 2004)¹⁾，迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda) (李筠等, 2006)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) (张伟妮等, 2006)、鳗弧菌(Oisson et al, 2006)、假交替单胞菌(Pseudoalteromonas espejiana) (刘朝阳等, 2009)。在养殖过程中由于疾病的频繁发生，养殖者使用各类抗生素和化学药物进行疾病防控，长期的抗生素选择压力下，细菌的抗药谱易发生变化，不仅严重影响养殖生物的质量安全，增加病原细菌对各类抗生素的耐药性，同时还可能产生多重耐药性，加大了治疗难度，给养殖业者造成更多的经济损失，海域生态环境也遭到破坏(战文斌等, 2004)。因此，养殖过程中重大疾病的流行性预测及病原菌耐药性变化趋势的实时监测，对指导健康养殖、减少疾病发生、增强渔药的高效安全使用具有重要的现实意义。

1) Zhang Z. Epizootic investigation and aetiological study on the bacterial diseases in cultured turbot (Scophthalmus maximus). Master's Thesis of Ocean University of China, 2004 [张正.养殖大菱鲆流行病调查及主要细菌性疾病的病原学研究.中国海洋大学硕士研究生学位论文, 2004]

本团队自2001年起针对大菱鲆病害开展了基础性研究，分离保存了大量细菌性病原并进行了广泛的病原学研究。根据养殖大菱鲆腹水病病原的相关报道，其病因确定为细菌性病原。为了详细了解大菱鲆腹水病致病原的流行性规律及其耐药状况，对实验室多年来由养殖户送检的大菱鲆腹水病样品中分离保存的优势菌株进行了鉴定，分析并检测了菌株对22种抗生素的耐药性，系统分析山东半岛不同养殖区域腹水病致病原的差异以及病原耐药性变化规律，旨在为大菱鲆养殖过程中的疾病发生预警和安全用药提供理论依据和技术支持。

2002-2010年期间，中国水产科学研究院黄海水产研究所收集了27例来自山东半岛沿海大菱鲆主要养殖区养殖户送检的患腹水病大菱鲆病样，从样品中分离纯化了27株优势病原菌。将纯化后的菌株用含20%甘油、1.5% NaCl的菌种保藏液制备成菌悬液，保存于-80℃冰箱中。其活化方法为取细菌冻存液在

室温下解冻，采用划线法接种于胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)上，28℃培养24 h后备用。

选取了目前常见的22种抗生素，分别为青霉素类：青霉素(PEN，10 μg/片)，苯唑青霉素(OXA，1 μg/片)；头孢菌素类：头孢哌酮(CPF，75 μg/片)，头孢氨苄(LEX，30 μg/片)；大环内酯类：红霉素(ERY，15 μg/片)，乙酰螺旋霉素(SPI，30 μg/片)；四环素类：四环素(TET，30 μg/片)，强力霉素(DOX，30 μg/片)；氨基糖苷类：丁胺卡那(AMK，30 μg/片)，庆大霉素(GEN，10 μg/片)；喹诺酮类：吡哌酸(PPA，30 μg/片)，氧氟沙星(PFX，5μg/片)，诺氟沙星(NOR，10 μg/片)，环丙沙星(CIP，5 μg/片)，氟罗沙星(FLE，5 μg/片)，恩诺沙星(ENR，10 μg/片)；磺胺类：复方新诺明(T/S，25 μg/片)；硝基呋喃类药：痢特灵(FUR，300 μg/片)；氯霉素类：氯霉素(CHL，30 μg/片)，氟苯尼考(FFC，30 μg/片)；利福平类：利福平(RIF，15 μg/片)；多粘菌素类：多粘菌素B(POL，300 U)。用于耐药性实验的药敏纸片均购自杭州微生物试剂有限公司。

采用细菌基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物科技有限公司)提取活化后细菌的总DNA，以细菌16S rDNA基因通用引物27F(5'-AGAGTTTGATCC-TGGCTCAG-3')，1492R(5'-GGTTACCTTGTTACGAC-TT-3')进行PCR扩增。PCR反应条件：95℃预变性5 min；95℃变性60 s，52℃退火60 s，72℃延伸100 s，30个循环；72℃延伸20 min。对扩增产物进行切胶回收、纯化，连接转化后，选取阳性克隆测序，利用Blast分析将所得序列与NCBI核酸数据库进行比对分析，确定相应菌株的分类地位。

参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法(K-B法)进行。用游标卡尺测量抑菌圈直径，计算其平均值，选择大肠埃希菌作为质控菌株，根据NCCLS发布的标准判断其耐药性。

根据抑菌圈直径数值判断每株细菌对22种抗生素的耐药情况，分别以R(耐药)、Ⅰ(中性)、S(敏感)记录，从而得到每株菌株对测试抗生素的耐药谱，并对耐药谱进行命名统计。

同一类菌株的耐药率计算公式：

耐药率R%=对某一类抗生素耐药的菌株数量/总测试菌株数量×100

采用通用引物对2002-2010年期间于山东青岛、烟台和威海地区所分离到的27株大菱鲆腹水病致病菌的16S rDNA测序的Blast结果显示，27株细菌的16S rDNA基因序列与GenBank核酸数据库序列的最高相似性达99%-100%，结果见表 1。从表 1可以看出，大菱鲆弧菌10株、迟钝爱德华氏菌7株、鳗弧菌5株、哈维氏弧菌3株、假交替单胞菌2株。根据其他学者(张正等, 2004; 李筠等, 2006; 张伟妮等, 2006; Oisson et al, 2006; 刘朝阳等, 2009)的报道，上述细菌均为鲆鲽类腹水病的致病原。

表 1(Tab. 1)

表 1 27株细菌16S rDNA鉴定结果 Table 1 Results of 16S rDNA identification for 27 bacterial strains 序号 No. 菌株 编号 Strain No. 采样 时间 Sampling time 采样地点 Sampling sites 鉴定结果 Identification result 1 Q261 2002-06 青岛Qingdao V. anguillarum 2 W271 2002-07 威海Weihai V. harveyi 3 Y281 2002-08 烟台Yantai P. espejiana 4 Q282 2002-08 青岛Qingtao E. tarda 5 W283 2002-08 威海Weihai V. harveyi 6 Q291 2002-09 青岛Qingdao V. anguillarum 7 Y292 2002-09 烟台Yantai V. harveyi 8 Y293 2002-09 烟台Yantai P. espejiana 9 W294 2002-09 威海Weihai V. scophthalmi 10 Q2101 2002-10 青岛Qingdao V. scophthalmi 11 Q2111 2002-11 青岛Qingdao V. anguillarum 12 Q2112 2002-11 青岛Qingdao V. scophthalmi 13 Q311 2003-01 青岛Qingdao V. scophthalmi 14 Q312 2003-01 青岛Qingdao E. tarda 15 W351 2003-05 威海Weihai V. scophthalmi 16 Y352 2003-05 烟台Yantai E. tarda 17 Q421 2004-02 青岛Qingdao V. scophthalmi 18 W4101 2004-10 威海Weihai E. tarda 19 Q641 2006-04 青岛Qingdao V. scophthalmi 20 W651 2006-05 威海Weihai V. anguillarum 21 Q771 2007-07 青岛Qingdao V. scophthalmi 22 Q8111 2008-11 青岛Qingdao V. scophthalmi 23 Q1011 2010-01 威海Weihai E. tarda 24 Y1041 2010-04 烟台Yantai E. tarda 25 Y1051 2010-05 烟台Yantai V. anguillarum 26 Q1081 2010-08 青岛Qingdao V. scophthalmi 27 W1082 2010-08 威海Weihai E. tarda

表 1 27株细菌16S rDNA鉴定结果 Table 1 Results of 16S rDNA identification for 27 bacterial strains

不同地区腹水病病原的区别见图 1。从图 1可以看出，青岛、威海、烟台病原菌分别有13株、8株、6株。其中，鳗弧菌(5株)、迟钝爱德华氏菌(7株)在3个地区均有分布；大菱鲆弧菌(10株)在青岛、威海地区出现；哈维氏弧菌(3株)由威海、烟台地区的样品中分离；假交替单胞菌(2株)只在烟台地区出现。

图 1(Fig. 1)

图 1 不同养殖区域腹水病病原菌的分布 Figure 1 Distribution of the pathogens associated with ascetic disease at different location

2002-2010年各年5类致病原的分布结果见图 2。从图 2可以看出，大菱鲆弧菌在每年的病样中均有分离，具有连续性，始终是感染大菱鲆腹水病的主要致病原；迟钝爱德华氏菌随时间分离得到的概率由2002年的8%增加到2010年的60%；哈维氏弧菌和假交替单胞菌在早期有样品中得到，在后期中并未分离得到；鳗弧菌在2002年、2006年和2010年均有分离。

图 1(Fig. 1)

图 2 病原菌检出率随时间的变化 Figure 2 Change of detectable rate of pathogenic strain during 2002-2010

5类细菌对22种抗生素的耐药程度不同(图 3)。5类细菌对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、复方新诺明耐药率高于50%。大菱鲆弧菌、哈维氏弧菌、迟钝爱德华氏菌对四环素类的耐药率在20%-30%之间，鳗弧菌和假交替单胞菌对TET无耐药性。5类病原菌对AMK、GEN、FUR、CHL、RIF、POL的耐药率差异较大，大菱鲆弧菌对6种抗生素的耐药率在10%-50%；哈维氏弧菌对AMK、GEN、RIF、POL耐药率大于50%，对FUR、CHL耐药率为25%；鳗弧菌对AMK、GEN、RIF、POL、FUR的耐药率为40%-60%，对CHL无耐药性；迟钝爱德华氏菌对AMK、GEN、RIF、POL耐药率高于50%，对FUR耐药率为14.3%，对CHL耐药率为28.6%；假交替单胞菌对AMK、GEN、RIF、POL、FUR均无耐药性，对CHL耐药率为50%。5类病原菌对喹诺酮类药物的耐药性存在差异，所有菌株对PPA、ENR耐药率高于50%；大菱鲆弧菌、哈维弧菌对NOR、CIP、FLE耐药率在20%-50%；假交替单胞菌对这3种抗菌素均无耐药性；鳗弧菌对NOR、CIP无耐药性，对FLE耐药率为20%；迟钝爱德华氏菌对NOR无耐药性，对CIP、FLE耐药率分别为28.6%、14.3%；大菱鲆弧菌对PFX的耐药率为10%，其余4类菌株对PFX无耐药性。此外，迟钝爱德华氏菌对FFC的耐药率为14.3%(1/7)，其他4类细菌对其无耐药性。

图 1(Fig. 1)

图 3 5类病原菌对22种抗菌药物的耐药情况 Figure 3 Resistance of 22 antibiotics of five types of pathogens

迟钝爱德华氏菌、鳗弧菌和大菱鲆弧菌耐药率随时间的变化情况见表 2。从表 2可以看出，哈维氏弧菌和假交替单胞菌的数量较小，不具备分析其耐药率的变化规律条件。迟钝爱德华氏菌对CPF、ERY、TET、DOX、AMK、PPA、ENR、T/S、FFC、RIF的耐药率提高，对GEN、FUR的耐药率降低。鳗弧菌对LEX、ERY、AMK、GEN、T/S、RIF的耐药率提高，对FUR的耐药率降低。大菱鲆弧菌对ERY、T/S、RIF的耐药率提升，对FUR、CHL的耐药性减弱。

表 2(Tab. 2)

表 2 3类菌株对22种药物的耐药率变化情况 Table 2 Changes of resistance rate among three pathogenic strains in response to 22 antibiotics agents (%) 抗菌药物 Antibacterials 迟钝爱德华氏菌E. tarda 鳗弧菌V. anguillarum 大菱鲆弧菌V. scophthalmi R1 R2 R1 R2 R1 R2 青霉素 PEN 100 100 66.7 100 100 100 苯唑青霉素 OXA 100 100 100 100 83.3 75 头孢哌酮 CPF 75 100 100 100 66.7 75 头孢氨苄 LEX 50 33.3 66.7 100 83.3 50 红霉素 ERY 75 100 33.3 100 16.7 50 乙酰螺旋霉素 SPI 100 100 66.7 50 50 75 四环素 TET 25 33.3 0 0 33.3 25 强力霉素 DOX 0 33.3 0 0 16.7 25 丁胺卡那 AMK 50 66.7 33.3 50 33.3 25 庆大霉素 GEN 100 66.7 0 100 16.7 25 吡哌酸 PPA 75 100 100 50 100 75 氧氟沙星 PFX 0 0 0 0 16.7 0 诺氟沙星 NOR 0 0 0 0 16.7 75 环丙沙星 CIP 25 33.3 0 0 16.7 50 氟罗沙星 FLE 25 0 0 50 16.7 25 恩诺沙星 ENR 75 100 100 100 100 100 复方新诺明 T/S 75 100 66.7 100 83.3 100 痢特灵 FUR 25 0 66.7 0 66.7 25 氯霉素 CHL 25 33.3 0 0 33.3 25 氟苯尼考 FFC 0 33.3 0 0 0 0 利福平 RIF 75 100 0 50 0 25 多粘菌素 POL 100 66.7 33.3 100 50 25  注：R1为2002-2005年菌株的耐药率；R2为2006-2010年菌株的耐药率  Note: R1: the strains resistance rate from 2002 to 2005; R1: the strains resistance rate from 2006 to 2010

表 2 3类菌株对22种药物的耐药率变化情况 Table 2 Changes of resistance rate among three pathogenic strains in response to 22 antibiotics agents (%)

耐药谱型可分为27种，结果见表 3。从表 3可以看出，A-J为大菱鲆弧菌的耐药谱，K-Q为迟钝爱德华氏菌的耐药谱，R-V是鳗弧菌的耐药谱，W-Y是哈维氏弧菌的耐药谱，Z、α为假交替单胞菌的耐药谱。27株病原菌都对应唯一的耐药谱，且从耐药数量上看，所有的病原菌对至少4种以上的抗生素具有耐药性，6株对6-9种抗生素产生耐药性，20株(74.1%)对10种以上的抗生素产生耐药，有1株哈维氏弧菌对17种抗生素产生了耐药性。

表 3(Tab. 3)

表 3 27株病原菌株耐药谱型 Table 3 Antibiogram types of 27 pathogenic bacterium 谱型 Types 耐药数量 Number of resistance 菌株编号 Strain number 耐药谱 Antibiogram A 7 W294 PEN, OXA, CPF, PPA, ENR, T/S, FUR B 10 Q2101 PEN, OXA, CPF, LEX, AMK, PPA, ENR/T/S, FUR, POL C 10 Q2112 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, PPA, ENR, FUR, POL D 11 Q311 PEN, OXA, CPF, LEX, SPI, TET, DOX, PPA, ENR, T/S, CHL E 9 W351 PEN, LEX, AMK, GEN, PPA, FLE, ENR, T/S, POL F 13 Q421 PEN, OXA, LEX, SPI, TET, PPA, PFX, NOR, CIP, ENR, T/S, FUR, CHL G 11 Q641 PEN, OXA, CPF, LEX, SPI, PPA, NOR, FLE, ENR, T/S, POL H 15 Q771 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, AMK, GEN, PPA, NOR, CIP, ENR, T/S, FUR, RIF I 7 Q8111 PEN, OXA, ERY, SPI, PPA, ENR, T/S J 9 Q1081 PEN, CPF, TET, DOX, NOR, CIP, ENR, T/S, CHL K 13 Q282 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, GEN, PPA, CIP, FLE, ENR, RIF, POL L 13 Q312 PEN, OXA, CPF, ERY, SPI, AMK, GEN, PPA, ENR, T/S, FUR, RIF, POL M 8 Y352 PEN, OXA, LEX, SPI, AMK, GEN, T/S, POL N 13 W4101 PEN, OXA, CPF, ERY, SPI, TET, GEN, PPA, ENR, T/S, CHL, RIF, POL O 15 W1011 PEN, OXA, CPF, ERY, SPI, TET, DOX, PPA, CIP, ENR, T/S, CHL, FFC, RIF, POL P 12 Y1041 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, AMK, GEN, PPA, ENR, T/S, RIF Q 12 W1082 PEN, OXA, CPF, ERY, SPI, AMK, GEN, PPA, ENR, T/S, RIF, POL R 10 Q261 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, PPA, ENR, FUR, ERY S 10 Q291 PEN, OXA, CPF, LEX, SPI, AMK, PPA, ENR, T/S, FUR T 6 Q2111 OXA, CPF, PPA, ENR, T/S, POL U 12 W651 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, GEN, PPA, FLE, ENR, T/S, ERY, POL V 12 Y1051 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, AMK, GEN, ENR, T/S, ERY, POL W 17 W271 PEN, OXA, LEX, ERY, SPI, TET, DOX, AMK, GEN, PPA, CIP, ENR, T/S, FUR, CHL, RIF, POL X 15 W283 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, AMK, GEN, PPA, NOR, CIP, FLE, ENR, T/S, RIF Y 12 Y292 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, AMK, PPA, ENR, T/S, RIF, POL Z 4 Y281 PEN, OXA, LEX, T/S α 10 Y293 PEN, OXA, CPF, LEX, ERY, SPI, PPA, ENR, T/S, CHL

表 3 27株病原菌株耐药谱型 Table 3 Antibiogram types of 27 pathogenic bacterium

在本研究的前期工作中，根据不同养殖区送检的27例大菱鲆疾病样品流行性调查与检测分析可知，这27例样品均患有腹水病。通过对分离纯化的病原菌16S rDNA测序分析来看，大菱鲆腹水病的致病原有大菱鲆弧菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌、迟钝爱德华氏菌和假交替单胞菌。不同地区发现的主要致病原也有所不同，青岛地区以大菱鲆弧菌为主，威海地区以迟钝爱德华氏菌为主。疾病的发生与环境、饵料、自身免疫力等因素密切相关。在大菱鲆的人工养殖中，其养殖条件多样，各个地区的养殖水域环境也各不相同，养殖户的苗种来源不同，投入饵料等也存在差异，从而可能导致不同养殖地区大菱鲆腹水病的病原存在多样性和差异性。

目前，病原菌的耐药性问题在水产养殖病害防治中得到越来越多的关注，很多学者针对细菌耐药性开展调查。写腊月等(2011)报道了184株弧菌对8类13种抗生素的耐药情况，对T/S、RIF、卡那霉素的耐药率分别为57.6%、54.3%、45.7%，且80.4%的菌株对3种以上的药物产生了耐药性，说明菌株的多重耐药性现象严重。刘旭等(2015)报道了养殖大菱鲆和半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)样品中分离的弧菌对ERY、T/S的耐药率高达57.1%、44.3%，多重耐药菌株比例78.6%。葛慕湘等(2015)报道了35株分离自牙鲆的迟钝爱德华氏菌对青霉素、RIF、卡那霉素的耐药率分别为100%、42.9%和28.6%，所有菌株都具有多重耐药性，大部分的菌株对7-9种抗生素有耐药性。刘朝阳等(2009)由大菱鲆分离出的假交替单胞菌耐药性检测中发现，该菌株对REN、T/S、RIF、CHL耐药，对CPF敏感。由此可知，细菌耐药性在水产养殖中普遍存在，且大多数细菌均有多重耐药性，这与本研究得到的结果基本吻合。

细菌的耐药性分为固有耐药性和遗传耐药性，细菌耐药性的产生是由于在外界抗生素的选择压力下，自身基因突变或者通过耐药质粒转移作用从外界获得新的耐药基因(Alderman et al, 1998)。PEN、PPA、T/S、RIF作为水产疾病治疗中常用的抗菌药，5类细菌对其耐药率均高于50%，而且耐药率随着时间的延续而增强，这可能与养殖户在疾病治疗过程中盲目选择抗生素、缺乏针对性、用药剂量大、用药方法不当有一定的关系。

20世纪80、90年代，CHL是我国水产养殖病害防治中的常用抗生素，但易产生耐药性，极易造成再生障碍性贫血等缺点，2002年3月被国家明令禁止。FFC作为新一代的氯霉素类动物专用合成抗生素具有广谱抗菌、杀菌作用强、不易产生耐药性、易吸收、毒副作用小等优点，被广泛应用于水产养殖疾病防控中(朱黎明, 2004)。刘淇等(2004)研究对比了CHL与FFC对8株水生生物致病性弧菌的抑菌效果差异，结果显示，FFC对临床分离的致病原抑菌杀菌效果明显优于CHL。在本研究中，大菱鲆弧菌、哈维氏弧菌、迟钝爱德华氏菌、假交替单胞菌对CHL的耐药率高于25%，只有鳗弧菌对CHL无耐药性；而迟钝爱德华氏菌对FFC的耐药率为14.3%，其他4类细菌对其无耐药性。这也说明了FFC的抗菌作用优于CHL，而且在长期使用过程中不易产生耐药性，说明FFC为一种优良的水产疾病抗菌药物。

此外，根据27株病原菌的耐药谱可见，每个菌株具备自己独特的耐药谱，74.1%的菌株对10种以上的抗生素产生了耐药性，说明这些病原菌普遍存在多重耐药性，由此也增加了疾病治疗的难度。在实际生产中，为了避免细菌耐药性的增强和多重耐药性的产生，应该合理选用药物，对症用药；确保药物的最佳用量，适宜的用药疗程和日投药次数；避免长期使用同一种或一类抗生素，探索科学合理的联合用药方式。

在疾病治疗中，采取“以防为主，防治结合”的基本原则。抗生素的大量使用会导致细菌对抗生素产生耐药性，还可能产生多重耐药性，不仅加大了治疗的难度，也会影响海域环境(李国烈等, 2012)。近年来有研究表明，中草药在治疗大菱鲆腹水病的治疗中可发挥良好作用，有效控制疾病的发展(张建等, 2013)。任海等(2010)发明了一种对大菱鲆腹水病、肠炎病、红体病等细菌性疾病有良好的预防和治疗作用的复方中草药，治愈率可达到80%以上。中草药还可以增强机体的非特异性免疫力和抗病能力(李华等, 2013)。此外，在养殖过程中还可以使用益生菌对腹水病进行预防和治疗。益生菌可以对病原菌产生竞争性抑制，还可以产生抑制性物质，从而达到杀菌或者抑菌的作用。同时，益生菌还可以提高机体的免疫功能，从而抵御病原菌侵袭的能力(Pandiyan et al, 2013)。樊瑞锋等(2011)从健康大菱鲆肠道内分离一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，将该菌作为饲料添加剂与饵料混合后投喂大菱鲆，不仅不影响它正常生长，还对大菱鲆腹水病和肠炎病的致病菌有很好的拮抗作用。另外，渔用疫苗的开发也能够对疾病的预防产生良好的效果，不仅能提高动物自身的免疫水平、增强机体对疾病的抵抗能力，还符合绿色、环保的要求，因此，渔用疫苗受到越来越多的关注。张正等(2004)发明了一种鲆鲽鱼类五联灭活疫苗，接种后可以有效预防鲆鲽鱼类受鳗弧菌、大菱鲆弧菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、迟钝爱德华氏菌5种细菌性病原菌的感染。

细菌耐药性的产生并不是单一因素影响，而是与多种条件相关(Neu, 1992)。本实验主要进行了细菌耐药表型的相关研究，在后续的工作中应深入探讨影响细菌耐药性的具体原因、耐药性产生的机理等问题。在养殖过程中，需要长期对不同养殖环境、不同养殖区域的各种疾病病原菌进行耐药监测和耐药性流行性分析，以便及时了解各种疾病的流行性状况、病原的分布特点和耐药性的变化规律、在疾病的治疗中用药剂量、用药频率以及给药方式等对细菌耐药性产生的影响，为水产动物疾病的预警和合理使用抗生素提供有力的证据。虽然本研究团队采集了大量样品，但由于保存时间较久，有些年份的菌株活化率不足，造成样品量不均衡，所以上述结果仅供读者参考，今后仍需积累样品进行更加完善的研究分析。