泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)隶属鲤形目(Cypriniformes)、鳅科(Cobitidae)、花鳅亚科(Cobitinae)，泥鳅属(Misgurnus)。台湾泥鳅(Paramis-gumus dabryanus ssp)是中国台湾地区改良的泥鳅新品种，其具体分类地位暂不明确(邱楚雯等, 2017)。台湾泥鳅因其生长迅速、个体大、养殖密度高、抗病力强、养殖周期短、易捕捞等特点，备受养殖户的欢迎和消费者青睐。随着台湾泥鳅规模化养殖的开展，对人工配合饲料品质的要求也不断提高。目前，有关台湾泥鳅的研究主要集中在人工繁殖、形态学等方面(邱楚雯等, 2014; 黄涛等, 2016)，台湾泥鳅对饲料中蛋白质等营养素需求量的研究未见报道。

蛋白质作为核心营养成分，能够为鱼体提供合成蛋白质所需的氨基酸，是细胞、组织和机体的重要组成部分，同时还作为能量源支持鱼体生长和代谢(Jobling, 2012)，是决定鱼类生长和发育的关键因素之一。饲料中蛋白质含量的高低会对鱼体生长产生很大影响，饲料中蛋白质含量过低，会延缓上市时间，影响经济效益，同时对鱼类的成活率也有一定影响(Eguia et al, 2000)。但是，在饲料中添加过量的蛋白质，除增加养殖成本外，过量的蛋白质会被鱼类通过氧化脱氨基作用分解，产生大量的氨氮排泄物，从而导致养殖水体污染，不利于生态环境的可持续发展(Tibbetts et al, 2000; Yang et al, 2002)。为了保证良好的养殖经济效益和生态效应，人工配合饲料中的蛋白水平必须根据养殖鱼类的实际蛋白需求量进行设定。

本研究以台湾泥鳅幼鱼为对象，通过研究不同蛋白水平对其生长性能、饲料利用率及免疫酶活性的影响，探讨台湾泥鳅幼鱼的最适蛋白需求量，为台湾泥鳅人工饲料的进一步研究提供一定的理论基础。

本实验利用3种不同的蛋白源(鱼粉、豆粕和菜粕)和3种不同的糖源(脂肪源、玉米粉和次粉)设计出不同蛋白梯度4种等脂等能实验饲料(25%、30%、35%和40%)。通过60目筛将粉碎后的原料按照上述比例称重并混匀后，放于–4℃冰箱保存备用。基础实验饲料组成见表 1。

表 1(Tab. 1)

表 1 基础饲料配方及营养组成(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis, %) 原料Ingredients 蛋白质含量 Dietary protein level(%) 25 30 35 40 玉米粉Corn meal 35.20 22.20 11.80 0.10 次粉Wheat middling 12.50 12.50 12.50 12.50 豆粕Soybean meal 18.40 18.40 18.40 18.40 α-纤维素α-Cellulose 0.00 2.00 4.00 6.00 鱼粉Fish meal 17.00 27.00 36.40 46.20 菜粕Rapeseed meal 8.00 8.00 8.00 8.00 预混料Premix1 2.00 2.00 2.00 2.00 氯化胆碱Choline chloride 1.00 1.00 1.00 1.00 食盐NaCl 0.20 0.20 0.20 0.20 大豆油Soybean oil 4.20 4.20 4.20 4.10 磷酸二氢钙Ca(H2PO4)2·H2O 1.50 1.50 1.50 1.50 营养成分Nutrient level2   粗蛋白CP 24.98 30.17 35.05 40.15   粗脂肪EE 6.60 6.64 6.68 6.62   水分Moisture 10.24 10.11 10.32 10.28   总能Gross energy (MJ/kg) 3.22 3.19 3.16 3.12   粗灰分Ash 10.03 10.12 9.87 10.07 注：1.复合预混料为每千克饲料提供的维生素和矿物元素：维生素A 30000 IU；维生素B1 50 mg；维生素B2 60 mg；维生素B6 40 mg；维生素B12 0.2 mg；维生素C 200 mg；维生素E 600 mg；维生素D 325000 IU；维生素K 100 mg；泛酸钙120 mg；尼克酸100 mg；叶酸20 mg；生物素7 mg；肌醇250 mg；CuSO4·5H2O 7.20 g；FeSO4·7H2O 122.0 g；MnSO4·H2O 5.16 g；KI 6.58 g；ZnSO4·7H2O 15.56 g；NaSeO3 2.10 g。2.饲料营养成分为实测值 Notes: 1. The compound premix provided vitamin and mineral for a kilogram of diets: Vitamin A 30000 IU, Vitamin B1 50 mg, Vitamin B2 60 mg, Vitamin B6 40 mg, Vitamin Bl2 0.2 mg, Vitamin C 200 mg, Vitamin E 600 mg, Vitamin D 325000 IU, Vitamin K 100 mg, Calcium pantothenate 120 mg, Nicotinic acid 100 mg, Folic acid 20 mg, Biotin 7 mg, Inositol 250 mg, CuSO4·5H2O 7.20 g, FeSO4·7H2O 122.0 g, MnSO4·H2O 5.16 g, KI 6.58 g, ZnSO4·7H2O 15.56 g, NaSeO3 2.10 g. 2. The feed nutrient contents were measured values

表 1 基础饲料配方及营养组成(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis, %)

本实验动物购自重庆市荣昌区祥光泥鳅养殖场，运回实验室后，立即用3%~5%的盐水进行消毒，于1.2 m×0.5 m×0.8 m的水池暂养7 d后，选择健康、无伤病的台湾泥鳅幼鱼720尾[体重为(8.57±0.35) g]，随机分为4组，每组3个重复，每个重复60尾鱼，并分别放入12个水泥池中(1.2 m× 0.5 m×0.8 m)，分别投喂不同蛋白水平的4种实验饲料。投喂前先将粉料加入少量水充分搅拌，捏成面团状进行投喂，每天表观饱食投喂3次(07:00、12:00和17:00)，投饵1 h后将残饵及粪便捞出，实验周期为60 d。养殖期间，每天于17:00~19:00用曝气后的自来水换水1/3。每天观察记录实验鱼的健康状况以及水质、水温等。养殖期间水温为20℃~24℃，pH为7.0~7.5，溶氧≥6.0 mg/L。

养殖实验结束后，对实验鱼进行饥饿处理(24 h)，分别从各平行实验组随机取10尾台湾泥鳅，用MS-222溶液(50 mg/L)麻醉，测定体重后解剖并分离肝胰脏，参照叶元土等(2015)的方法进行肝胰脏粗酶液的制备。

实验开始时，测定实验鱼的初始体重，实验结束后，停食1 d，测定各组实验鱼体重，依据养殖期间饲料的投喂量、饲养时间及实验前后鱼的体重，计算其特定生长率、蛋白质效率、蛋白质沉积率、摄食率、饲料效率和成活率。

特定生长率(Specific growth rate，SGR，%/d)= (ln终末体重-ln初始体重)×100/养殖天数

蛋白质效率(Protein efficiency ratio，PER)=(终末体重-初始体重)/蛋白质摄入量

蛋白质沉积率(Protein retention efficiency，PRE，%)=100×蛋白质增加量/蛋白质摄入量

摄食率(Feeding rate，FR，%)=100×摄食量/[养殖天数×(初始体重+终末体重)/2]

饲料效率(Feed efficiency ratio，FER)=(终末体重-初始体重)/饲料摄入量

成活率(Survival rate，SR，%)=100×(终末尾数-初始尾数)/初始尾数

采用磷酸苯二钠法测定酸性磷酸酶(Acid phosphatase，ACP)(李影林, 1987)。ACP酶活性单位定义为：以每10 mg肝胰脏组织在37℃与底物作用60 min，产生1 mg酚为1个酶活力单位(U/mg)。采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定肝脏和血浆谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活力。采用微量考马斯亮蓝法测定肝脏蛋白含量，试剂盒购于南京建成生物工程研究所，具体操作参照试剂盒说明书进行。采用连苯三酚自氧化法测定(顾含真等, 2006)超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性。SOD活性单位定义为1 g肝组织反应液中SOD抑制率达到50%时所对应的SOD量(U/g)；过氧化氢酶(Catalase，CAT)活性测定采用高锰酸钾滴定法测定(孔德胜等, 2012)。CAT酶活性单位定义为每1 g肝组织每1 min分解H₂O₂的量为1个酶活性单位(U/g)。

实验结果用平均值±标准差(Means±SD)表示。实验数据采用SPSS 19.0统计软件中One-way ANOVA进行单因素方差分析，若组间存在显著差异，再进行Duncan氏进行多重比较，差异显著水平为P < 0.05。

饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼生长性能及饲料利用率的影响见表 2。随着饲料蛋白水平的升高，台湾泥鳅幼鱼末重(FW)、特定生长率(SGR)和饲料效率(FER)先上升，饲料蛋白水平≥35%后进入平台期。SGR在饲料蛋白水平为35%时最大(2.13%/d)；FER则在饲料蛋白水平为40%时最大(0.98)。蛋白质效率(PER)、蛋白质沉积率(PRE)和成活率(SR)均呈先升高后降低的变化趋势，且均在饲料蛋白含量为35%时达最大值，分别为2.77、44.73%和98.89%。摄食率(FR)则呈逐渐降低的趋势。FW、SGR和FER的折线模拟结果(图 1、图 2和图 5)表明，台湾泥鳅幼鱼(8.57 g)达到最佳生长速度及饲料效率的饲料蛋白水平为34.57%~35.37%。以二次曲线来拟合饲料蛋白水平(x)与PER(y₁)和PRE(y₂)的关系，得回归方程y₁= –38x²+ 25.54x–1.583 (R²=0.8094)，y₂ = –724x²+502.12x–43.669 (R²=0.8636)，则PER和PRE最高时，饲料蛋白水平分别为33.61%和34.68%。

表 2(Tab. 2)

表 2 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼生长性能及饲料利用率的影响(平均值±标准差) Table 2 Effect of dietary protein level on the growth and feed efficiency of P. dabryanus ssp (Mean±SD) 蛋白水平 Dietary protein levels (%) 初重 Initial weight (g) 末重 Final weight (g) 特定生长率SGR (%/d) 蛋白质效率PER 蛋白质沉积率 PRE (%) 摄食率 FR (%) 饲料效率FER 成活率 SR (%) 25 8.59±0.20 19.94±0.46a 1.40±0.01a 2.45±0.02a 37.06±0.27a 2.16±0.02d 0.61±0.01a 86.67±3.34a 30 8.31±0.50 24.07±0.31b 1.77±0.08b 2.59±0.06b 40.46±0.93b 2.09±0.04c 0.78±0.02b 92.22±1.92b 35 8.67±0.12 31.22±0.99c 2.13±0.03c 2.77±0.09c 44.73±1.51c 1.94±0.04b 0.97±0.03c 98.89±1.92c 40 8.70±0.35 30.65±1.96c 2.10±0.07c 2.53±0.06ab 40.89±0.9b 1.83±0.03a 0.98±0.02c 97.78±1.92c 注：所给数据为平均值及3个重复标准差；同列肩标相同小写字母或无字母表示差异不显著(P > 0.05)，不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)。下同 Note: Data were means and standard deviation of three replicates. In the same column, values with same small letter superscripts or no superscripts denoted no significant difference (P > 0.05), and different small letter superscripts denoted significant differences (P < 0.05). The same as bellow

表 2 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼生长性能及饲料利用率的影响(平均值±标准差) Table 2 Effect of dietary protein level on the growth and feed efficiency of P. dabryanus ssp (Mean±SD)

图 1(Fig. 1)

图 1 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼增重率的影响 Figure 1 Effects of dietary protein level on the final weight of P. dabryanus ssp

图 1(Fig. 1)

图 2 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼饲料系数的影响 Figure 2 Effects of dietary protein level on the specific growth rate of P. dabryanus ssp

图 1(Fig. 1)

图 3 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼蛋白质效率的影响 Figure 3 Effects of dietary protein level on the protein efficiency ratio of P. dabryanus ssp

图 1(Fig. 1)

图 4 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼蛋白质沉积率的影响 Figure 4 Effects of dietary protein level on the protein retention efficiency of P. dabryanus ssp

图 1(Fig. 1)

图 5 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼摄食率的影响 Figure 5 Effects of dietary protein level on the feeding rate of P. dabryanus ssp

图 1(Fig. 1)

图 6 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼饲料效率的影响 Figure 6 Effects of dietary protein level on the feed efficiency ratio of P. dabryanus ssp

饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼肝胰脏免疫酶活性的影响见表 3。随着饲料蛋白水平的升高，台湾泥鳅幼鱼肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先升高后趋于稳定的变化趋势，且在饲料蛋白为35%时达最大值，为118.44 U/g，SOD活性在饲料蛋白为35%和40%的实验组之间差异不显著。肝胰脏过氧化氢酶(CAT)活性随着饲料蛋白水平升高，呈先升高后降低的变化趋势，在饲料蛋白含量为35%时达最大值，为18.01 U/g。肝胰脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)均随着饲料蛋白水平的升高，呈现先升高后降低的变化趋势，且均在饲料蛋白含量为35%时达最大值，分别为12.59 U/mg和29.81 U/mg。

表 3(Tab. 3)

表 3 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼肝胰脏免疫酶活性的影响(平均值±标准差) Table 3 Effect of dietary protein level on the immuno-enzymatic activity of P. dabryanus ssp (Mean±SD) 蛋白水平 Dietary protein level (%) 超氧化物歧化酶 SOD (U/g) 过氧化氢酶 CAT (U/g) 酸性磷酸酶 ACP (U/mg) 谷丙转氨酶 GPT (U/mg) 谷草转氨酶 GOT (U/mg) 25 61.92±4.78a 12.45±0.62a 59.58±3.71 9.72±0.21a 24.77±0.61a 30 97.42±4.10b 14.74±0.37b 57.76±4.69 11.47±0.24b 28.68±0.60c 35 118.44±3.66c 18.01±0.72c 59.32±5.29 12.59±0.51c 29.81±0.24d 40 113.97±4.17c 14.22±0.57d 59.80±4.10 9.97±0.50a 25.74±0.36b

表 3 饲料蛋白水平对台湾泥鳅幼鱼肝胰脏免疫酶活性的影响(平均值±标准差) Table 3 Effect of dietary protein level on the immuno-enzymatic activity of P. dabryanus ssp (Mean±SD)

本研究发现：随着饲料蛋白水平的提高，鱼类生长先上升后进入平台期，生长曲线符合鱼类和饲料蛋白水平之间的生长-剂量关系(Robbins et al, 1979)。Martínez-Palacios等(2007)研究表明，在饲料中添加适量的蛋白质可以促进鱼类生长，但过量添加不仅会导致养殖成本的增加，而且鱼类会通过脱氨基作用把过量的蛋白质消耗。研究显示，饲料蛋白水平对鱼类的生长和饲料的利用效率有显著影响(刘伟等, 2016; 李彬等, 2014)，如在对黑线鳕(Melanogrammus aeglefinus)、墨西哥原银汉鱼(Menidia estor)和短体下眼鲿(Horabagrus brachysoma)的研究中均发现，鱼类生长会随着饲料中蛋白水平提高先上升后趋于稳定(Kim et al, 2001; Martínez-Palacios et al, 2007; Giri et al, 2011)。但徐革锋等(2016)对细鳞鲑(Brachymystax lenok)和Ozório等(2009)对项带重牙鲷(Diplodus vulgaris)的研究发现，高水平的饲料蛋白会抑制鱼类生长，出现这种差异的原因可能与鱼类的种间特异性、实验动物的规格及饲料营养成分不同有关，其机制还有待进一步研究。

鱼类摄食是为了满足自身对能量和营养素的需求，其受饲料蛋白水平的影响(Luo et al, 2005; Wang et al, 2005)。本研究发现，投喂不同蛋白水平的等能饲料，台湾泥鳅摄食率随着粗蛋白含量的增加呈现下降趋势，这与Peres等(1999)对舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)的研究结果一致。出现这种现象的原因可能是由于本研究采用的是等脂等能饲料，机体为了满足对蛋白质的需求，低蛋白组鱼类通过提高摄食率的方式做出补偿性调节。

本研究表明，随着饲料蛋白水平的不断增加，鱼类蛋白质效率呈现先升高后降低的变化趋势。陈壮等(2014)对鲈鱼(Lateolabrax japonicus)研究发现，饲料粗蛋白水平为45%时，蛋白质效率达到最大，但当蛋白水平继续升高时，蛋白质效率显著下降，与本研究结果一致。这可能是由于高蛋白组的非蛋白能量供应不足，使一部分饲料蛋白被鱼体分解转化为能量，从而导致饲料蛋白质效率下降(Santiago et al, 1991)。然而，Lee等(2000)对牙鲆(Paralichthys olivaceus)、Kim等(2005)对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)的研究发现，随饲料蛋白水平的不断增加，蛋白质效率呈现显著降低趋势(P < 0.05)。张磊等(2016)对达氏鲟(Acipenser dabryanus)研究发现，饲料蛋白水平在30%~40%时，蛋白质效率并无显著差异，但当饲料蛋白水平从40%增加到50%时，蛋白质效率呈现显著下降的趋势，出现这种现象的原因可能与鱼的种类和饲料营养成分相关。

在本研究中，随着饲料蛋白水平的升高，饲料效率呈逐渐升高的变化趋势，在饲料蛋白含量≥35%后，逐渐趋于稳定。这与星斑川鲽幼鱼(丁立云等, 2010)和大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)(Lee et al, 2003)的研究结果一致。因此，在鱼体内添加适宜水平蛋白质，可以促进鱼体的生长，提高饲料效率，但是当添加过量时，会导致鱼体生长受阻，蛋白质利用效率下降。

饲料蛋白水平可在一定程度上影响鱼体非特异性免疫功能。SOD和CAT是体现鱼类抗氧化能力的重要指标，杨弘等(2012)对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼研究发现，适当提高饲料蛋白含量可提高尼罗罗非鱼幼鱼SOD和CAT。Lee等(2003)研究发现，SOD可以通过减弱活性氧自由基对机体造成的损伤。另外，CAT可以通过催化机体的H₂O₂等，生成H₂O和O₂，从而减轻和防止自由基对细胞的毒害。本研究发现，台湾泥鳅肝脏中SOD随着饲料蛋白水平升高呈现先升高后进入平台期的现象，但CAT呈现先上升后下降的趋势，这与王美琴等(2009)对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)和Mourente等(2002)对金头鲷(Sparus aurata)的研究结果类似。

GOT和GPT是衡量机体肝细胞损伤的重要标志(张宝龙等, 2015)。在本研究中，随着饲料蛋白水平的升高，台湾泥鳅幼鱼肝胰脏GOT和GPT活性呈先升高后降低的趋势。对鲤鱼(Cyprinus carpio)、镜鲤(Cyprinus specularis)、拟目乌贼(Sepia lycidas)的研究均发现，鱼体肝胰脏GOT和GPT均随饲料蛋白水平升高呈先升高后降低的变化趋势(鹿璇等, 2014; 张宝龙等, 2015; 唐玲等, 2011; 汪元等, 2016)，与本研究结果一致。在饲料中添加适宜水平的蛋白，可以满足鱼体生长的基础需要；但当添加过量时，会对鱼类生长代谢造成影响，从而对肝脏造成损坏，使肝脏中的GOT和GPT流入血液，肝脏中GOT和GPT含量减少。本研究表明，台湾泥鳅的非特异性免疫功能在一定程度上受到饲料蛋白水平的影响，添加适宜的蛋白水平可以提高鱼类机体的抗病能力。

本研究发现，适宜的饲料蛋白水平可促进台湾泥鳅幼鱼的生长、提高饲料效率、增强免疫酶活性，但过量添加时，会导致鱼类生长受阻，蛋白质效率、免疫酶活性和成活率下降。综上所述，考虑到生长性能、饲料利用率及免疫酶活性，台湾泥鳅幼鱼饲料最适蛋白水平为34.68%~35.37%。