维生素D₃为脂溶性类固醇衍生物，是水生动物生长所必需的营养素(黎德兵等, 2015)。水生动物自身不能合成或者合成量不能满足机体的需要，必需从食物中获取足量的维生素D₃来满足机体生理生化功能的需要(彭翔等, 2010; Yanik et al, 2016)。已有研究表明，维生素D₃能够促进肠道黏膜上皮细胞Ca结合蛋白的形成，促进Ca、P的吸收，调节体内Ca、P平衡(李爱杰, 1996)。此外，维生素D₃还参与协调提高机体的免疫(付京花等, 2006)及抗氧化能力(Martínez-Álvarez et al, 2005)。目前，有关水生动物对维生素D₃最适需求量的研究主要集中在鲤鱼(Cyprinus carpio)(张桐等, 2011)，黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco) (段鸣鸣等, 2014)，鲈鱼(Lateolabrax japonicus)(张璐等, 2016)，草鱼(Ctenopharyngodon idellus)(蒋明等, 2009)等鱼类，有关仿刺参(Apostichopus japonicus)幼参对维生素D₃的最适需求量未见报道。

仿刺参具有较高保健功效及经济价值，是我国渤海和黄海水域的重要海水养殖种类(张德瑞等, 2016)。目前，维生素在仿刺参饲料中的应用研究较少，仅见维生素C(Luo et al, 2014)和维生素E(汪将, 2014)对仿刺参生长和免疫特性影响的研究。因此，本研究通过在饲料中添加不同水平的维生素D₃，研究其对仿刺参幼参生长、消化酶活力及免疫能力的影响，以期为仿刺参对饲料中维生素D₃的需求量提供参考。

实验分为6个处理组，每个处理组3个重复，每个重复30头仿刺参[(15.43±0.14) g]。实验所用维生素D₃含量为500000 IU/g(浙江新维普添加剂有限公司)。以鱼粉和发酵豆粕为蛋白源，鱼油和大豆卵磷脂为脂肪源，配制粗蛋白含量为22%，粗脂肪含量为4%的基础饲料，在基础饲料中分别添加0、250、500、1000、2000、3000 IU/kg的维生素D₃，配制成6种实验饲料，命名为D1、D2、D3、D4、D5、D6。固体原料超微粉碎过200目标准筛，按配比称重，加入新鲜鱼油及适量的蒸馏水混匀，用小型颗粒饲料挤压机制成直径为0.3 cm、厚度为0.05 cm的片状饲料，60℃烘干备用。实验饲料配方及营养组成见表 1。

表 1(Tab.1)

表 1 实验饲料配方及营养成分(干物质%) Tab.1 Formulation and proximate composition of experimental diets (Dry matter %) 原料Ingredients 组别Groups D1 D2 D3 D4 D5 D6 鱼粉Fish meal 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 发酵豆粕Fermented soybean meal 9.00 9.00 9.00 9.00 9.00 9.00 虾粉Shrimp meal 13.00 13.00 13.00 13.00 13.00 13.00 藻粉Algae powder 12.00 12.00 12.00 12.00 12.00 12.00 小麦粉Wheat flour 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 α-淀粉α-Starch 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 鱼油Fish oil 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 大豆卵磷脂Soybean lecithin 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 维生素预混料Vitamin premixa 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 维生素D Vitamin D (IU/kg) 0.00 250.00 500.00 1000.00 2000.00 3000.00 矿物质预混料Mineral premixb 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 海泥Sea mud 36.00 36.00 36.00 36.00 36.00 36.00 总计Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 成分分析Proximate composition 粗蛋白Crude protein 22.69 22.49 22.42 22.82 22.52 22.17 粗脂肪Crude lipid 4.06 4.46 4.72 4.05 4.04 4.28 粗灰分Crude ash 44.16 44.30 44.30 44.14 44.07 44.10 能量Energy (kJ/g) 14.15 14.21 14.18 14.35 14.33 14.46 钙Calcium 2.43 2.32 2.53 2.51 2.48 2.51 磷Phosphorus 0.85 0.83 0.85 0.82 0.83 0.81 维生素D3 Vitamin D3 (IU/kg) 95.00 334.00 570.00 1076.00 2063.00 3081.00 a维生素预混料(mg/kg饲料)：维生素A，38.0;α-生育酚，210.0;硫胺素，115.0;核黄素，380.0;盐酸吡哆醇，88.0;泛酸，368.0;烟酸，1030.0;生物素，10.0;叶酸，20.0;维生素B12，1.3;肌醇，4000.0;抗坏血酸，500.0 b矿物质预混料配方组成见文献(王际英等, 2014) a Vitamin premix (mg/kg diet): vitamin A, 38.0; alpha-tocopherol, 210.0; thiamin, 115.0; riboflavin, 380.0; pyridoxine HCl, 88.0; pantothenic acid, 368.0; niacin acid, 1030.0; biotin, 10.0; folic acid, 20.0; vitamin B12, 1.3; inositol, 4000.0; ascorbic acid, 500.0 b Same contents of mineral premix as reference Wang et al (2014)

表 1 实验饲料配方及营养成分(干物质%) Tab.1 Formulation and proximate composition of experimental diets (Dry matter %)

养殖实验在山东省海洋资源与环境研究院东营实验基地循环水养殖系统中进行，实验用仿刺参幼参购自山东蓬莱安源水产有限公司。挑选大小均匀、健康无病的仿刺参于养殖系统中暂养15 d，期间投喂基础饲料。待其完全适应饲养条件后，随机分为6个处理组，每个处理组3个重复，每个重复30头仿刺参，平均体重为(15.43±0.14) g，随机放养于18个圆柱形养殖桶(70 cm×80 cm)中，控制水深为60 cm，实验周期为56 d。每桶放海参养殖筐2个，内嵌波纹板20张，每隔30 d更换养殖筐1次。养殖期间，控制水温为17~19℃，水流速为2 L/min，盐度为26~28，pH为7.6~8.2，溶解氧 > 5.0 mg/L，氨氮(NH₄-N)和亚硝酸盐(NaNO₂) < 0.05 mg/L。每天08:00换水，换水量为1/3，每天16:00投饵1次，初始投喂量占体重的2%，每天观察仿刺参的摄食情况及时调整投喂量，并记录水温及死亡情况。每3 d吸底1次，用虹吸法将残饵及粪便吸出，养殖实验在弱光环境下进行。

养殖实验结束后，控食48 h，统计各桶仿刺参的数量并称重，用于存活率(Survival rate, SR, %)、增重率(Weight gain rate, WGR, %)、特定生长率(Specific growth rate, SGR, %/d)及肠体比(Ratio of intestine weight to body weight, IWR, %)的计算。每桶随机取8头置于洁净的泡沫板上，用滤纸轻轻将仿刺参体表的水分吸干后分别称重。去除体腔液后，置冰盘上分离肠道和体壁。肠道去除内容物，用定性滤纸擦净后分别称重，将肠道样品和体壁放在-20℃条件下冷冻保存，待测。

式中，W₀为实验初仿刺参体重，W_t为实验末仿刺参体重，d为实验天数，W_i为实验末仿刺参肠道重量。

饲料及体壁水分采用105℃烘干至恒重法(GB/T6435-2014);粗蛋白采用凯氏定氮法(GB/T6432-2006);粗脂肪采用索氏抽提法(GB/T6433-2006);粗灰分采用550℃马弗炉灼烧法(GB/T6438-2007);Ca采用乙二胺四乙酸二钠络合滴定法(GB/T6436-2002)、总磷采用分光光度法(GB/T6437-2002)。饲料能量采用燃烧法(IKA, C6000, 德国); 饲料维生素D₃在通标标准技术(青岛)有限公司采用高效液相色谱法-皂化提取法(GB/T 17818-2010)测定。测定步骤：称取样品进行皂化，将皂化液转移到分液漏斗中进行提取，最后将提取液进行蒸干浓缩，加入甲醇溶解，进行过滤，得到待测液，用高效液相色谱仪(Agilent 1200, 美国)检测; 体壁Mg、Fe、Mn采用浓硝酸微波消解后用电感耦合等离子体质谱仪(Agilent 7700, 美国)测定; 体壁羟脯氨酸采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测定; 体壁维生素D₃含量采用上海酶联生物科技有限公司ELISA试剂盒测定，具体测定步骤参照试剂盒说明书。

取肠道样品，剪碎，加入9倍体积冰冷的生理盐水(0.9%)，制成10%的匀浆，在4℃条件下，8000 r/min离心10 min，取出上清液，分装于2 ml的离心管中，保存于-80℃冰箱，待测。

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AKP)、总超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase, T-SOD)、过氧化氢酶(Catalase, CAT)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)以及总抗氧化能力(Total antioxidant capacity, T-AOC)均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定，碱性磷酸酶活力单位转化为国际单位，其他酶活定义及具体测定步骤参照试剂盒说明书。

采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析(One- way ANOVA)，当处理之间差异显著(P < 0.05)时，用Duncan’s检验进行多重比较分析。统计数据以平均值±标准误(Mean±SE)表示。

饲料维生素D₃对仿刺参的SR无显著影响(P > 0.05)，随着饲料维生素D₃含量的增加，WGR及SGR呈先上升后下降的趋势，均在D4组达到最高值，D1组显著低于其他组(P < 0.05)。D3、D4、D5组IWR显著高于其他3组(P < 0.05)，但3组之间差异不显著(P > 0.05)(表 2)。

表 2(Tab.2)

表 2 饲料维生素D3对仿刺参幼参生长性能及形体指标的影响 Tab.2 Effects of dietary vitamin D3 on growth performance and physical indices of juvenile sea cucumber A. japonicus 生长性能 Growth performances 组别Groups D1 D2 D3 D4 D5 D6 初体重Initial body weight (g) 15.41±0.10 15.44±0.10 15.48±0.02 15.40±0.08 15.45±0.13 15.41±0.11 终体重Final body weight (g) 18.97±0.34a 21.54±0.28b 23.10±0.22c 25.41±0.31d 25.49±0.16d 20.85±0.03b 存活率SR (%) 91.33±2.69 86.44±2.79 88.67±2.40 86.67±1.93 86.22±3.47 91.78±0.97 增重率WGR (%) 20.55±0.78a 34.85±1.24b 49.41±1.38c 65.43±1.23d 63.70±1.54d 34.6±0.51b 特定生长率SGR (%/d) 0.32±0.01a 0.49±0.00b 0.67±0.02c 0.84±0.01d 0.82±0.02d 0.50±0.01b 肠体比IWR (%) 2.70±0.08a 2.73±0.01a 3.38±0.06b 3.37±0.06b 3.70±0.13b 2.75±0.16a 注：表格中同行肩标相同小写字母或无字母表示差异不显著(P > 0.05)，不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)，下表同 Note: In the same row, values with same small letter superscripts or no letter superscripts mean no significant difference (P > 0.05), different small letter superscripts mean significant difference (P > 0.05), the same as below

表 2 饲料维生素D3对仿刺参幼参生长性能及形体指标的影响 Tab.2 Effects of dietary vitamin D3 on growth performance and physical indices of juvenile sea cucumber A. japonicus

以WGR为评价指标，经一元二次回归分析得出，初始体重为15.43 g的仿刺参对饲料中维生素D₃的最适需求量为1587.5 IU/kg(图 1)。

图 1(Fig. 1)

图 1 维生素D3水平与仿刺参增重率的相关性分析 Fig.1 Relationship between dietary vitamin D3 level and weight gain rate (WGR) of A. japonicus

饲料维生素D₃显著影响了仿刺参体壁粗灰分、Ca、P、Mg、Fe及羟脯氨酸含量(P < 0.05)，但对水分、粗蛋白、粗脂肪及Mn含量影响不显著(P > 0.05)。随着饲料维生素D₃含量的增加，粗灰分含量呈上升趋势，D3、D4、D5组无显著性差异(P > 0.05)，D1、D2、D6组显著低于D4、D5组(P < 0.05)，与D3组无显著性差异(P > 0.05);羟脯氨酸含量呈先降后升的趋势，D4组达到最低值，D1、D6组无显著性差异，显著高于其他4组(P < 0.05);仿刺参体壁维生素D₃沉积量与羟脯氨酸呈相同趋势，但D4组显著高于其他组(P < 0.05)，D4、D5、D6组显著高于D1、D2组(P < 0.05)，D5、D6组与D3组间无显著性差异(P > 0.05)(表 3)。

表 3(Tab.3)

表 3 饲料维生素D3对仿刺参幼参体壁基本成分的影响 Tab.3 Effects of dietary vitamin D3 on body wall composition of juvenile sea cucumber A. japonicus 体组成 Body composition 组别Groups D1 D2 D3 D4 D5 D6 水分Moisture (%) 91.56±0.22 91.60±0.27 91.22±0.18 91.52±0.33 91.29±0.47 91.60±0.28 粗蛋白Crude protein (%*) 45.88±0.02 45.68±0.00 45.73±0.13 46.01±0.24 45.59±0.12 45.57±0.12 粗脂肪Crude lipid (%*) 3.67±0.14 3.77±0.17 3.47±0.12 3.46±0.08 3.42±0.07 3.51±0.12 粗灰分Crude ash (%*) 35.82±0.06a 36.23±0.58a 36.48±0.05ab 37.89±0.97b 38.06±0.20b 36.07±0.38a 羟脯氨酸Hydroxyproline (μg/g) 1000.23±7.96e 923.15±3.18d 659.22±13.78b 488.18±4.96a 816.70±11.90c 984.81±2.23e 维生素D3 Vitamin D3 (μg/kg) 224.95±4.73a 223.59±10.12a 232.89±1.96ab 273.90±3.95c 245.35±4.32b 240.03±7.33ab *：粗蛋白、粗脂肪、粗灰分为干基含量 *: Contents of crude protein, crude lipid, crude ash are based on dry basis

表 3 饲料维生素D3对仿刺参幼参体壁基本成分的影响 Tab.3 Effects of dietary vitamin D3 on body wall composition of juvenile sea cucumber A. japonicus

饲料维生素D₃显著提高了仿刺参体壁Ca含量，各组显著高于D1组(P < 0.05);随着饲料维生素D₃含量的增加，P含量呈先上升后平稳的趋势，D1、D2组无显著性差异(P > 0.05)，D4、D5、D6组显著高于D1、D2组(P < 0.05)，且3组间无显著性差异(P > 0.05)，D3组显著高于D1组(P < 0.05)，与其他4组间无显著性差异(P > 0.05);Mg含量呈上升趋势，D1组显著低于其他组(P < 0.05);Fe含量呈先升后降趋势，D5、D6组显著低于其他组(P < 0.05)，D5、D6组间无显著性差异(P > 0.05);Mn含量呈下降趋势，但各组间差异不显著(P >0.05)(表 4)。

表 4(Tab.4)

表 4 饲料维生素D3对仿刺参体壁矿物元素含量的影响 Tab.4 Effects of dietary vitamin D3 on mineral contents of the body wall of A. japonicus 体组成 Body composition 组别Groups D1 D2 D3 D4 D5 D6 钙Ca (mg/g*) 12.39±0.05a 13.29±0.01bc 13.50±0.17cd 13.71±0.12cd 13.89±0.06d 13.20±0.29b 磷P (mg/g*) 9.07±0.01a 9.12±0.01ab 9.25±0.09bc 9.28±0.02c 9.36±0.01c 9.34±0.08c 镁Mg (mg/g*) 8.74±0.17a 9.95±0.20b 10.46±0.44bc 10.86±0.35cd 11.36±0.14d 12.17±0.11e 铁Fe (mg/kg*) 41.28±0.18b 48.63±1.67c 50.40±2.42c 48.12±2.77c 29.45±0.08a 30.06±1.11a 锰Mn (mg/kg*) 5.42±0.37 5.46±0.01 5.28±0.28 5.05±0.23 5.12±0.15 5.16±0.25 *：钙、磷、镁、铁、锰为干基含量 *: Contents of calcium, phosphorus, magnesium, iron and manganese are based on dry basis

表 4 饲料维生素D3对仿刺参体壁矿物元素含量的影响 Tab.4 Effects of dietary vitamin D3 on mineral contents of the body wall of A. japonicus

随着饲料维生素D₃含量的增加，仿刺参肠道AKP及T-SOD活力均呈先上升后下降的趋势，AKP活力在D4组达到最高值，D1组显著低于其他各组(P < 0.05);D1、D6组T-SOD活力显著低于其他各组(P < 0.05)，D1、D6组间无显著性差异(P > 0.05)，D5组达到最高值。MDA含量随着饲料维生素D₃含量的增加呈下降趋势; CAT活力及T-AOC受饲料维生素D₃含量的影响不显著(P > 0.05)(表 5)。

表 5(Tab.5)

表 5 饲料维生素D3对仿刺参肠道抗氧化酶活力的影响 Tab.5 Effects of dietary vitamin D3 on antioxidant enzyme activities of intestine of juvenile sea cucumber A. japonicus 免疫指标 Immune parameters 组别(Groups) D1 D2 D3 D4 D5 D6 碱性磷酸酶AKP (U/g prot) 2.58±0.02a 3.06±0.01b 3.90±0.00c 5.16±0.00d 3.88±0.12c 3.80±0.05c 总超氧化物歧化酶SOD(U/mg prot) 186.46±3.31a 218.52±8.06b 229.71±2.06b 231.73±5.96b 284.40±6.71c 221.83±4.61a 丙二醛含量MDA (nmol/mg prot) 4.48±0.17c 4.24±0.03c 3.92±0.12b 3.88±0.03b 2.95±0.03a 2.91±0.07a 过氧化氢酶CAT (U/mg prot) 41.32±0.27 42.67±0.66 41.80±0.69 41.26±1.29 40.82±1.27 41.31±0.58 总抗氧化能力T-AOC (U/mg prot) 0.33±0.00 0.33±0.02 0.33±0.01 0.34±0.03 0.33±0.01 0.32±0.02

表 5 饲料维生素D3对仿刺参肠道抗氧化酶活力的影响 Tab.5 Effects of dietary vitamin D3 on antioxidant enzyme activities of intestine of juvenile sea cucumber A. japonicus

关于维生素D₃促进动物生长的研究报道已有很多，维生素D₃可从激素、细胞及分子水平上影响动物的生长和Ca结合蛋白的形成(Maalouf, 2008)，适量添加可促进动物生长，但过量添加会抑制动物的生长，甚至产生毒性。本研究中，随着饲料中维生素D₃含量的增加，各组仿刺参SR没有显著性差异，WGR和SGR呈先升后降的趋势，D4组达到最高值，当饲料维生素D₃含量为3000 IU/kg时，仿刺参WGR和SGR明显下降，与在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis) (孙新瑾, 2009)、凡纳滨对虾(Penaeus monodon)(He et al, 1992)、皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai) (周歧存等, 2004)研究结果一致。仿刺参体腔液中Ca含量比较丰富，适量的维生素D₃能够促进甲状腺激素的分泌，进而提高仿刺参的生长速度(张璐等, 2016);而高水平的维生素D₃对维生素A和维生素E的吸收有拮抗作用，这在一定程度上会降低动物的生长速度(陈娟等, 2010)。随着饲料维生素D₃含量的增加，仿刺参的IWR呈先升后降趋势，说明适量的维生素D₃能够促进肠道的发育，提高仿刺参的生长性能。以WGR为评价指标时，经一元二次回归分析得出，仿刺参幼参对维生素D₃的最适需求量为1587.5 IU/kg。

养殖动物的体成分随配合饲料组成的不同而发生变化，包括粗蛋白、粗脂肪、水分、粗灰分等。本研究中，仿刺参体壁水分含量不受饲料维生素D₃含量的影响，这与蒋明等(2009)对草鱼的研究结果一致，表明不同含量的维生素D₃对仿刺参体壁干物质的积累程度无显著影响; 仿刺参的生长性能及体壁粗蛋白含量与饲料蛋白水平有关(王庆吉等, 2014;赵斌等, 2016)，而本研究各组仿刺参体壁粗蛋白含量差异不显著，表明当饲料中蛋白质含量一致时，体壁粗蛋白含量并不能真实的反映仿刺参的生长情况。随着维生素D₃含量的增加，各组仿刺参体壁粗脂肪含量无显著性差异，这与虹鳟(Oncorhynchus mykiss) (Barnett et al, 1982)及皱纹盘鲍(周歧存等, 2004)的研究结果不一致，仿刺参自身对脂肪的需求量与鱼类相比较低，因此维生素D₃对仿刺参的脂肪代谢可能影响不大。羟脯氨酸是胶原蛋白的主要成分之一，是反映胶原蛋白数量的常见指标。本研究中，随着饲料维生素D₃含量的增加，仿刺参体壁中羟脯氨酸含量呈先降后升的趋势，D4组为最低值。骨骼的主要成分为骨盐(钙盐和磷酸盐)和有机基质(Ⅰ型胶原)，从仿刺参体壁中提取的胶原蛋白氨基酸组成与Ⅰ型胶原蛋白的氨基酸组成相似(崔凤霞等, 2006)，当摄食饲料中维生素D₃缺乏和过多时，会导致仿刺参体壁骨盐减少、Ⅰ型胶原含量上升，从而使体壁中羟脯氨酸含量升高; 仿刺参体壁中维生素D₃的沉积量随着饲料维生素D₃含量的增加呈先升后降的趋势，说明维生素D₃在促进动物生长的同时增加了自身在机体内的沉积量。

维生素D₃对骨骼矿化以及Ca、P的沉积作用是浓度依赖型，在适宜浓度范围内，维生素D₃含量的增加能够促进骨骼矿化和Ca、P沉积，过高或过低均会导致骨骼矿化异常。本研究发现，饲料维生素D₃含量显著影响了仿刺参体壁粗灰分及Ca、P含量，当含量为1000、2000 IU/kg时，仿刺参体壁粗灰分、Ca、P含量显著高于D1组，添加量为3000 IU/kg时，粗灰分及Ca含量呈下降趋势，但P含量趋于稳定。仿刺参生活在含Ca丰富的海水中，可以从海水中吸收Ca满足机体的生理代谢需要。饲料中适量的维生素D₃能够促进矿物质在体壁中的积累，粗灰分及Ca含量上升; 但过量的补充维生素D₃则抑制矿物质沉积(Graff et al, 2015)，粗灰分及Ca含量下降; 而海水中P含量较低，体壁中的P主要来源于饲料，因此，饲料维生素D₃含量过高时，同样能够促进P的吸收; Mg在细胞代谢及骨骼发育过程中起着重要的作用，在体内，Mg与Ca的代谢密切相关，本研究仿刺参体壁Mg含量随饲料维生素D₃含量的增加而增加，D1组显著低于其他组，Ca与Mg结构相似，在一定范围内，维生素D₃能够促进Mg的吸收。Fe是各种动物必需的矿物元素，是动物营养中最重要的微量元素之一，是生物机体生长发育不可缺少的条件(张佳明, 2007)，随着维生素D₃含量的增加，仿刺参体壁Fe含量呈先升后降趋势，说明机体在维生素D₃促进Fe²⁺吸收的同时受其他阳离子的影响。Mn是骨正常形成所必需的元素，机体对Mn的吸收利用受很多因素的影响(王秋梅, 2007)，本研究随着维生素D₃含量的增加，各组仿刺参体壁Mn含量无显著性差异，表明机体对Mn的吸收不受维生素D₃含量的影响，与在肉鸡上的研究结果不一致(张淑云等, 2010)，可能与养殖对象的种类有关。

仿刺参缺乏特异性的免疫系统，只有体壁和体内防御机制共同组成的非特异性免疫体系(白阳等, 2016)。仿刺参体内的免疫主要分为细胞免疫和体液免疫，二者之间密切相关，相辅相成。仿刺参肠道免疫及抗氧化酶活力的高低可以间接地反应机体的健康状况(常杰等, 2011)。

碱性磷酸酶(AKP)是一种含Zn对底物专一性较低的磷酸单脂水解酶，在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，与机体的Ca、P代谢有关(Haussler et al, 1970; Norman et al, 1970)。本研究中，随着饲料维生素D₃含量的增加，仿刺参肠道AKP活力呈先上升后下降的趋势，D4组达到最高值，与斑节对虾(Penaeus monodon)研究结果一致(Shiau et al, 1994)。AKP存在于骨、肠道等组织中，在生理剂量范围内，维生素D₃促进了肠道对Ca、P的吸收，AKP活力上升，当维生素D₃含量过高时，抑制了肠道对Ca、P的吸收，AKP活力下降。实验结果显示，维生素D₃与AKP活力存在良好的相关性。

抗氧化物酶系统被认为是免疫系统的一部分，是细胞抵御氧化损伤的主要武器。总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)等组成的抗氧化酶系统可以清除过多的自由基，保护机体免受活性氧基团(ROS)的损伤。T-SOD和CAT活力的高低间接地反应了机体清除氧自由基的能力。本研究中，随着饲料维生素D₃含量的增加，肠道T-SOD活力呈先上升后下降的趋势，并在D5组达到最高值，表明维生素D₃对T-SOD的生成有较强的诱导能力，增强机体的抗氧化能力。CAT具有重要的生理功能，在细胞内与产生H₂O₂的需氧脱氢酶类同时存在，可以催化H₂O₂分解为H₂O和O₂，和SOD协同完成细胞内的抗氧化作用。本研究仿刺参肠道CAT活力受饲料中维生素D₃含量影响不显著，这与在黄颡鱼(段鸣鸣等, 2014)的研究结果不一致，仿刺参是无脊椎动物，缺少脊椎动物所具有的特异性免疫器官，与SOD相比，较高含量的维生素D₃才能最大限度地提高CAT活力。总抗氧化能力(T-AOC)可以反映机体的抗应激能力(Rengpipat et al, 2000)，随着维生素D₃含量的增加，各实验组肠道T-AOC无显著性差异，而张淑云等(2010)研究发现，随饲粮维生素D₃含量的增加，肉鸡血清和肝脏中T-AOC呈上升趋势，与本研究结果不一致，这与动物种类及实验条件不同有关(Mourente et al, 2002)。丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物，其含量可以间接反映自由基的产生情况和机体组织细胞的脂质过氧化程度(Onderci et al, 2003)。本研究，随着饲料维生素D₃含量的增加，肠道中MDA的含量呈下降趋势，添加量为3000 IU/kg时，MDA含量最低。与在肉鸡(陈娟等, 2010)和蛋雏鸭(解俊美等, 2012)上研究结果一致，说明维生素D₃在提高仿刺参抗氧化能力方面具有一定的积极作用。

以WGR为评价指标，经一元二次线性回归分析可知，初始体重为15.43 g的仿刺参对饲料中维生素D₃的最适需求量为1587.5 IU/kg。饲料中适量的添加维生素D₃能够提高仿刺参的生长性能，对仿刺参体壁体组成产生一定的影响。饲料维生素D₃含量对仿刺参肠道蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶活力无显著性影响，但是适量的维生素D₃能够提高机体的抗氧化能力。