企鹅珍珠贝(Pteria penguin)是热带和亚热带的海产经济贝类，主要分布于我国广东、广西、海南等沿海地区以及日本九州南部、琉球群岛直至菲律宾等地(李治钤等, 2012)。近年来，该贝类在南方的养殖规模逐渐增大(栗志民等, 2011)。养殖过程需要进行运输，而苗种运输是水产养殖活动中不可或缺的环节之一(黄志峰等, 2020)，海区养殖、品种推广、商品交易等过程都有涉及(邓正华等, 2020)。

运输过程发生在较小的空间(Robertson et al, 1988)，是水生动物常见的一道工序，集约化水产养殖设施中的水生动物会在装载、运输和卸载相关的搬运和物理干扰中引发应激反应(Davis et al, 2002; Frisch et al, 2000)，有可能导致长期健康损害(Arends, 1999; Larsson et al, 1985)。缺乏科学方法的指导及运输后的有效管理手段，导致苗种运输后大量折损，影响生产效益(Carneiro et al, 2002)。运输活动对于水生生物体生理相关影响的研究目前主要集中在鱼类、甲壳类和棘皮动物等(陈梓聪, 2020; 张勇, 2016)，但企鹅珍珠贝运输等方面的研究资料尚缺乏。

本文以企鹅珍珠贝稚贝为研究对象，开展8h实际运输实验，比较有水运输和无水运输对企鹅珍珠贝稚贝的存活、生长、消化及抗氧化性能的影响，以期探讨运输过程及运输后恢复过程关键点所在，为优化企鹅珍珠贝苗种运输技术及运输后管理技术提供参考。

本研究所用企鹅珍珠贝稚贝为课题组在广西北海育苗场繁育所得，待其生长至稚贝阶段，选择大小规格相近的5 000只个体作为实验材料。所选实验稚贝体重为(0.15±0.01) mg，壳长(HL)为(7.4±0.4) mm，壳高(SH)为(4.1±0.3) mm，运输前1 d停止喂食。

运输胁迫处理为实际运输操作处理。汽车运输时间为8 h，车内温度约为20 ℃，实验准备约2 500只稚贝进行有水运输，将其放入5个网袋中，水体体积为35 L，水温控制在(20.0±2.0) ℃，运输过程持续充氧。约2 500只稚贝进行无水运输，泡沫箱内温度控制在(15.0±3.0) ℃，中间采用泡沫板隔断，一边放冰块使其运输环境保持低温，另一边底部使用泡沫块铺垫，防止冰水直接接触稚贝，在运输箱底部加入少量海水，然后将放入网袋的稚贝放在泡沫垫上方，再将多张使用海水浸湿的报纸铺在网袋上进行保湿处理(图 1)，使用湿度测量仪测试湿度，将湿度控制在80% r/h左右。

图 1(Fig. 1)

图 1 无水运输装置模式图 Fig.1 Diagram of waterless transportation device

相同运输条件下，实验样品分为3个组：(1)运输前样品，作为对照组，不同运输方式共用对照组样品；(2)运输后样品，为经过8 h运输后所得样品；(3)修复期样品，为运输后放入养殖水体中修复的样品，分别在修复7 d和14 d进行取样分析。

运输前和运输后养殖条件和管理手段基本一致，水温为(27.5±1.0) ℃，盐度为31.5±0.5，每天换2/3的水，投喂湛江等边金藻(Isochrysis zhanjiangensis)、牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)和亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)的混合藻液。

在运输实验前，将部分企鹅珍珠贝稚贝作为对照组放入液氮中，剩余稚贝分别采用有水运输和无水运输2种运输方式，并在运输完成后分别随机取样放入液氮中，将剩余的企鹅珍珠贝稚贝放入养殖池中进行暂养恢复，并在暂养后第7天和第14天后取样。取100只稚贝在冰面上解剖取其内脏团，准确称取待测企鹅珍珠贝内脏团的重量，按重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械摇匀，2 500 r/min离心10 min，取上清液用于酶活性测定，每个样品重复测定3次。

在数码显微镜下进行测量，主要为壳长和壳高，样本数为100只。

图 1(Fig. 1)

图 2 企鹅珍珠贝外壳形态 Fig.2 Pattern diagram of P. penguin juvenile morphology

通过万分天平测量100只企鹅贝稚贝的体重。

式中，N₁、N₂分别为随机抽取企鹅珍珠贝稚贝100只和其中存活的个数，并进行3个重复。

采用南京建成生物科技有限公司的生化试剂盒进行淀粉酶(α-AMS)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)的检测，操作方法严格按照说明书的方法进行。通过酶联免疫测定法测定企鹅珍珠贝稚贝内脏团皮质醇(COR)的含量。

实验数据以平均值±标准差(Mean±SD)表示。使用DPS统计软件进行差异性分析，P < 0.05为显著差异。

不同运输模式对企鹅珍珠贝后期恢复阶段SR、体重增加速度、壳长和壳高有显著影响(P < 0.05)(表 1)。有水运输后第14天的SR达(97.00±1.00)%，显著高于无水运输[(82.00±0.71)%]；有水运输后第7天和第14天的体重分别为(0.43±0.01)和(0.62±0.01) mg，显著高于无水运输[(0.19±0.02)和(0.24±0.02) mg]；有水运输后第7天和第14天的壳长分别为(9.05±0.70)和(12.56±0.60) mm，显著高于无水运输[(7.76±0.40)和(7.83±0.40) mm]；有水运输后第7天和第14天的壳高分别为(6.63±0.40)和(7.55±0.50) mm，显著高于无水运输[(4.68±0.40)和(5.09±0.60) mm]。

表 1(Tab.1)

表 1 不同运输模式对企鹅珍珠贝稚贝存活和生长的影响 Tab.1 Effects of different transportation modes on the survival and growth of P. penguin juvenile 指标Index 运输模式Transport modes 对照组Control 8 h 7 d 14 d 存活率 Survival rate/% 有水运输 100.00±1.10A, a 98.00±0.57AB, a 98.00±0.67ABa 97.00±1.00B, a 无水运输 100.00±1.10A, a 97.00±1.00B, a 97.00±0.71B, a 82.00±0.71C, b 体重 Weight/mg 有水运输 0.15±0.01C, a 0.16±0.02C, a 0.43±0.01B, a 0.62±0.01A, a 无水运输 0.15±0.01B, a 0.16±0.01B, a 0.19±0.02B, b 0.24±0.02A, b 壳长 Shell length/mm 有水运输 7.40±0.40C, a 7.50±0.50C, a 9.05±0.70B, a 12.56±0.6A, a 无水运输 7.40±0.20A, a 7.50±0.30A, a 7.76±0.40A, b 7.83±0.4A, b 壳高 Shell height/mm 有水运输 4.10±0.30C, a 4.75±0.50C, a 6.63±0.40B, a 7.55±0.5A, a 无水运输 4.10±0.30A, a 4.34±0.50A, a 4.68±0.40A, b 5.09±0.6A, b 注：不同大写字母表示相同运输方式下不同组别之间存在显著差异(P < 0.05)；不同小写字母表示相同组别的不同运输方式之间存在显著差异(P < 0.05)，下同。 Note: Different capital letters represent significant differences among different groups under the same mode of transportation (P < 0.05); Different lowercase letters represent significant differences between different modes of transport (P < 0.05) in the same group, the same below.

表 1 不同运输模式对企鹅珍珠贝稚贝存活和生长的影响 Tab.1 Effects of different transportation modes on the survival and growth of P. penguin juvenile

不同运输模式对企鹅珍珠贝的COR含量有显著影响(P < 0.05)。无水运输8 h后，COR含量由(1 989.90± 8.30) ng/L下降至(1 495.74±38.08) ng/L。有水运输COR含量则无显著变化[(1 977.91±12.46) ng/L]。

运输结束后放入养殖室中的恢复阶段，不同运输方式的COR含量存在显著差异(P < 0.05)。有水运输在第7天和第14天分别上升和下降至(2 061.87±32.45)和(1 999.50±10.18) ng/L。无水运输在恢复期第7天和第14天分别显著升高和下降至(2 450.48±47.92) ng/L和(1 668.46±20.36) ng/L(图 3)。

图 1(Fig. 1)

图 3 不同的运输方式对企鹅珍珠贝稚贝COR含量的影响 Fig.3 Effect of different transportation modes on cortisol content of P. penguin juvenile

不同运输方式对淀粉酶活性表达具有显著影响(P < 0.05)。有水运输8 h后，淀粉酶活性由(0.14± 0.01) U/mg prot上升至(0.66±0.01) U/mg prot，无水运输中，淀粉酶活性上升至(0.33±0.07) U/mg prot。

运输结束后，放入养殖室中的恢复阶段，不同运输方式的淀粉酶活性恢复程度之间存在显著差异(P < 0.05)。有水运输淀粉酶活性逐步升高，在恢复期第7天和14天分别显著增高至(0.74±0.04)和(1.56± 0.08) U/mg prot；无水运输在恢复期第7天和第14天分别显著升高至(0.87±0.08)和(1.06±0.04) U/mg prot (图 4)。

图 1(Fig. 1)

图 4 不同运输模式对企鹅珍珠贝稚贝淀粉酶活力的影响 Fig.4 Effect of different transportation modes on amylase activity of P. penguin juvenile

不同运输方式对企鹅珍珠贝的SOD、ACP、GOT和GPT活性产生显著影响(P < 0.05)。有水运输8 h后，SOD活性显著下降(P < 0.05)，由(98.65±0.42) U/mg prot显著下降至(77.01±1.17) U/mg prot。ACP、GPT和GOT活性显著上升(P < 0.05)，分别由(98.00±8.68)、(69.35±4.73)和(54.94±1.46) U/g prot上升至(130.04± 7.97)、(75.34±0.57)和(72.56±0.65) U/g prot。无水运输8 h后，SOD、GPT和GOT活性下降，分别下降至(45.70±0.76)、(20.18±0.59)和(40.63±7.34) U/g prot。ACP活性上升至(153.39±6.79) U/g prot。

运输结束后的恢复阶段，不同的运输方式其SOD、ACP、GOT和GPT活性恢复程度之间存在显著差异(P < 0.05)。有水运输后，SOD和ACP活性在恢复期第7天和第14天呈显著下降的趋势，SOD活性分别下降至(51.51±0.51)和(34.37±0.3) U/mg prot，ACP活性分别下降至(112.01±4.14)和(79.56±1.04) U/g prot。有水运输后，GPT和GOT活性恢复期第7天和第14天呈逐渐上升趋势，GPT分别上升至(35.95±4.24)和(43.03± 1.38) U/g prot；GOT分别上升至(65.68±7.89)和(84.31± 9.46) U/g prot。无水运输8 h后，SOD活性呈先上升后下降的趋势，分别上升至(86.60±0.19) U/mg prot和下降至(20.04±1.36) U/mg prot。ACP、GPT和GOT活性在恢复期第7天和第14天呈逐渐上升趋势，ACP活性分别上升至(87.97±3.83)和(168.24±3.46) U/g prot；GPT活性分别上升至(26.59±2.31)和(47.62±0.05) U/g prot。GOT活性分别上升至(65.68±7.89)和(84.31±9.46) U/g prot (图 5)。

图 1(Fig. 1)

图 5 不同运输方式对企鹅珍珠贝稚贝超氧化物歧化酶(a)、酸性磷酸酶(b)、谷草转氨酶(c)、谷丙转氨酶(d)活性的影响 Fig.5 Effects of different transportation modes on the activities of superoxide dismutase (a), alkaline phosphatase (b), glutamic-oxaloacetic transaminase (c) and glutamic-pyruvic transaminase (d) of P. penguin juvenile

运输胁迫在一定程度上影响贝类的生长状态(马壮等, 2020)。合适与科学的运输方式不会引起运输动物的大量死亡。低温下大菱鲆(Scophthalmus maximus)在经过有水保活，其SR达100% (刘伟东等, 2009)。本研究结果表明，企鹅珍珠贝稚贝在有水运输后，SR可达98%，无水运输后SR为97%。有水运输在恢复阶段第14天的SR达97%，显著高于无水运输。与(邓正华等 2020)研究结果较为一致。企鹅珍珠贝苗种运输在后续恢复过程中，有水运输的壳长、壳高和体重均高于无水运输，有水运输相对于无水运输在低温休眠的状态下，在水分充分且O₂充足的条件下，企鹅珍珠贝生命力更强，具有更好的存活效果和恢复效果。

COR含量的变化是体现应激程度的重要生理学指标之一(Hglund et al, 2019; James et al, 2005)，在低温和应激条件下显著增加(Qiang et al, 2015)。研究发现，马氏珠母贝(Pteria martensii)稚贝8 h运输后，COR含量呈先降低后上升的趋势，与上述研究结果不一致，其原因可能在于实验条件及实验对象生理状态差异。本研究在运输过程中，有水运输水温控制在20 ℃左右，无水运输箱内环境温度为13 ℃左右，相对一直处于温度较低环境，而低温环境在一定程度上可对机体形成一定麻痹作用，从而降低应激程度，也会抑制相关生物酶活力(Babiak et al, 2001; 闫秀明等, 2011)。

消化酶能消化和分解生物从外界摄取的食物，为个体提供生长、发育和繁殖等所需的能量，其活性的大小反映水产生物消化生理的基本特征(Deng et al, 2021)。本研究发现，企鹅珍珠贝稚贝在8 h运输后，其淀粉酶活性呈上升趋势，且在恢复期不断上升，有水运输后，其淀粉酶活性高于无水运输，这可能是由于机体在后期生长过程中，需要更多能量去抵抗外界的干扰，满足基础生理需求所致。本研究涉及的恢复期持续时间相对较长，可更全面地反映运输后企鹅珍珠贝稚贝后期的生理修复情况，通过内脏团的淀粉酶活性，可以了解企鹅珍珠贝稚贝在有水运输过程中，其消化系统受到的应激刺激相对较小，与实验条件下的无水运输环境相比，其机体在后期的生长速度较快，具有较好的消化能力。

抗氧化系统能清除体内过量的活性氧，保护机体不受氧化损伤(Suseela et al, 2007)，当机体受到胁迫时，体内ROS含量迅速增加，未被抗氧化系统及时清除的ROS逐渐积累，促使细胞膜脂质过氧化物形成，从而造成氧化损伤(Sun et al, 2011)。SOD、ACP、GOT和GPT活性是常见的评价指标(Rodrigo et al, 2009; 邓平平等, 2016)。SOD活性可反映生物体的氧化损伤程度，活性下降代表着清除能力的下降(Ross et al, 2001)。ACP、GOT和GPT活性则可反映机体的抗氧化水平及免疫健康状态(刘慧玲等, 2021)。运输活动一般都会对运输动物的抗氧化酶活力造成一定影响。本研究表明，企鹅珍珠贝稚贝运输活动后，SOD活性降低，与大菱鲆、脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)等运输相关的研究结果较为一致(邓高威等, 2021; 马壮等, 2020)，其原因可能是运输胁迫使机体体内大量自由基积累造成的机体损伤，从而其抗氧化能力下降(陈成勋等, 2011)。ACP、GPT和GOT活性在本研究中总体呈先上升后下降再上升的趋势，表明企鹅珍珠贝稚贝在运输过程中，会因相关因素的胁迫而产生一定程度的应激反应，而ACP、GOT和GPT活性的提高会降低机体过氧化应激，在一定程度上减缓机体的氧化损伤程度(尤宏争等, 2018)。企鹅珍珠贝稚贝在水体的保护下，其活动空间较大，贝苗之间不会接触过多。而在无水运输中，贝苗的活动范围较小，苗种密度相对较大，贝苗与贝苗之间容易产生碰撞摩擦，可能使其产生更强烈的应激。抗氧化酶活性的变化结果表明，企鹅珍珠贝稚贝在有水运输后的抗氧化性能优于无水运输，具有更强的抗氧化能力，健康状况更佳。

有水运输和无水运输在一定条件下对企鹅珍珠贝稚贝生长、消化性能、抗氧化性能可产生显著影响，且运输后需要一定时间进行机体机能的修复。在这2种运输方式下，有水运输效果及后期生理恢复情况相对较佳，具有较高的SR、生长更好。运输后的企鹅珍珠贝机体需要一定时间恢复至正常状态，继而适应或抵抗其他不良环境因素。