亚东鲑(Salmo trutta fario)，俗称河鲑、花点鱼、褐鳟，隶属于鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae)、鲑属(Salmon)；原产于欧洲、西亚和非洲北部地区，现今在我国仅在西藏日喀则市亚东县有自然种群分布。亚东鲑属于冷水性鱼类，长期生活在亚东河的山间河段。亚东鲑已成为亚东县标志性物种，且因其肉质鲜美等特点，深受消费者喜爱(王万良等, 2019)，具有较高的商业推广价值。在当地政府的大力扶持下，亚东鲑养殖产业已成为亚东县特色产业之一。

目前，亚东鲑已经实现全人工繁育，并且正逐步实现规模化的人工养殖(李琳等, 2022)。然而，在人工养殖的过程中，亚东鲑产卵期会产出2种不同颜色的卵(图 1)。目前，关于鱼类不同颜色卵的研究报道较少。鱼卵颜色很大程度上和色素含量相关。在大西洋鳕(Gadus morhua)和黄尾(Seriola quinqueradiata)上已经证明虾青素可以从亲体转移到卵中，并且可以改变亲鱼的产卵性能以及卵的质量，因此，卵的色素含量至少是卵质量差异的一个相关因素(Visuthi et al, 1997; Sawanboonchun et al, 2008)。在亚东鲑生产实践中已经表明，橘红色卵在受精率、孵化率、仔鱼7 d成活率和仔鱼畸形率方面全面优于黄色卵。然而，2种颜色卵中营养成分方面的差异还未有报道。本研究测定和比较2种颜色亚东鲑卵的基础营养成分，可为亚东鲑人工养殖过程中高质量卵的鉴别和筛选提供参考，也为亚东鲑亲鱼高质量配合饲料的开发提供参考。

图 1(Fig. 1)

图 1 亚东鲑2种颜色的卵 Fig.1 Yadong trout eggs with two different colors 左边为黄色卵，右边为橘红色卵。 The yellow eggs on the left and the orange eggs on the right.

本实验所采用2种亚东鲑鱼卵(黄色和橘红色)均来自西藏亚东县产业园亚东鲑繁育养殖基地(图 1)。黄色卵由2~3龄亲鱼所产，橘红色卵由3~5龄亲鱼所产，2种颜色鱼卵由同一批次不同亲鱼所产。经低温冷冻保存后空运至中国水产科学研究院黄海水产研究所，随后在所内实验室–20 ℃冰箱冷冻保存。每种卵3个重复样品，每个重复收集于3~5尾不同的亲鱼。2种鱼卵取适量于培养皿中，在真空冷冻干燥机(FDU-1100, EYELA)中冻干48 h。随后研磨成粉保存在4 ℃冰箱中，用于测定粗成分、脂肪酸、氨基酸等指标。

常规营养成分包括粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分。粗蛋白的测定采用凯氏定氮法。粗脂肪的测定采用索氏抽提法，通过石油醚抽提脂质。水分的测定在冷冻干燥的过程中进行测定。而灰分的测定中先使用电子万用炉将样品烧至无烟状态，然后使用马弗炉550 ℃高温灼烧6~8 h。碳水化合物含量和能量计算公式如下：

碳水化合物(%)=(1–粗蛋白含量–粗脂肪含量–水分含量–灰分含量)×100%

能量(kJ/g)=粗蛋白含量×16.7+粗脂肪含量×37.7+碳水化合物含量×16.7 (Ai et al, 2004)

脂肪酸采用气相色谱法(GC-2010Pro, 岛津, 日本)测定。取冷冻干燥后的样品加入1 mol/L的KOH–甲醇溶液2 mL，75 ℃水浴30 min，冷却后加入2 mol/L的HCl-甲醇溶液2 mL，75 ℃水浴30 min，再次冷却后，加入1 mL纯水和1 mL正己烷萃取1 h后取上清液上机测定。气相色谱仪配有熔融石英毛细管柱(SH-RT-2560, 100.00 m× 0.25 mm× 0.20 μm)和火焰电离探测器。升温程序：以15 ℃/min的速率从150 ℃升高到200 ℃；然后以2 ℃/min速率从200 ℃升高到250 ℃。进样器和探测器的温度为250 ℃。结果以每种脂肪酸相对于总脂肪酸的百分比表示(%总脂肪酸)。

取冻干后的样品加入6 mol/L的盐酸110 ℃下高温酸解22~24 h。使用氨基酸分析仪(自动氨基酸分析仪；日立高科技公司)测定卵的氨基酸组成。

根据生产商的说明，使用商业试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定卵中丙二醛和蛋白质羰基的含量。

参考GB/T 31520-2015方法。取冻干后的样品加无水硫酸镁和10 mL丙酮混匀溶解，取2 mL，加入2.9 mL 0.02 mol/L氢氧化钠甲醇溶液，混匀后充氮密封，在4 ℃冰箱中反应12~16 h，再加0.1 mL 0.6 mol/L磷酸甲醇溶液中和，涡旋混合后静置5 min，过膜上机。仪器：岛津LC-20A紫外检测器(SPD-20A)。上述测定过程由青岛菲优特检测有限公司执行。

参考GB 5009.82-2016方法测定。取冻干样品用索氏抽提的方法提出油脂，含有油脂的有机溶剂转移至蒸发瓶内，40 ℃水浴中减压蒸馏，将油脂用流动相转移至容量瓶中，加入二丁基羟基甲苯后涡旋混匀，用流动相定容后过有机系滤头于棕色进样瓶中，上机。仪器：岛津LC-20A紫外检测器(SPD-20A)。上述步骤由青岛菲优特检测有限公司执行。

所有统计数据以平均值±标准误(Mean±SE)表示，在SPSS 16.0中进行独立样本T检验，P<0.05为显著水平。

由表 1可知，亚东鲑黄色卵的粗脂肪和水分显著高于橘红色卵(P<0.05)，而粗蛋白和灰分显著低于橘红色卵(P<0.05)。2种卵的碳水化合物以及能量含量无显著差异(P>0.05)。

表 1(Tab.1)

表 1 亚东鲑黄色卵和橘红色卵常规成分含量(%鲜重) Tab.1 Proximate composition of yellow and orange eggs of Yadong trout (% wet weight) 指标 Parameter 黄色卵 Yellow eggs 橘红色卵 Orange eggs P值 P value 粗蛋白 Crude protein 40.08±0.20 41.61±0.25 0.008* 粗脂肪 Crude lipid 6.72±0.06 5.34±0.04 0.000* 碳水化合物 Carbohydrate 9.68±0.49 10.74±0.43 0.180 能量计算值 Calculated energy/(kJ/g) 10.84±0.06 10.75±0.05 0.318 水分 Moisture 41.07±0.29 39.53±0.26 0.017* 灰分 Ash 2.45±0.05 2.78±0.06 0.012* 注：*表示显著差异(P<0.05)。下同。 Note: * indicates significant difference (P<0.05). The same as below.

表 1 亚东鲑黄色卵和橘红色卵常规成分含量(%鲜重) Tab.1 Proximate composition of yellow and orange eggs of Yadong trout (% wet weight)

由表 2和图 2可知，亚东鲑黄色卵的SFA总量(包括C16:0、C18:0和C20:0单体)和n-3PUFA总量(包括C20:3n-3、C22:5n-3和C22:6n-3单体)以及PUFA总量显著低于橘红色卵(P<0.05)，而黄色卵中的MUFA总量(包括C16:1n-7、C18:1n-9、C20:1n-9和C22:1n-9单体)显著高于橘红色卵(P<0.05)。黄色卵和橘红色卵中n-6PUFA总量无显著差异(P>0.05)。

表 2(Tab.2)

表 2 亚东鲑黄色卵和橘红色卵的脂肪酸组成(%总脂肪酸) Tab.2 Fatty acid composition in yellow and orange eggs of Yadong trout (% total fatty acids) 脂肪酸 Fatty acid 黄色卵 Yellow eggs 橘红色卵 Orange eggs P值 P value C14:0 1.21±0.06 1.31±0.01 0.220 C16:0 9.30±0.04 9.95±0.00 0.003* C18:0 2.83±0.14 3.56±0.02 0.032* C20:0 0.08±0.01 0.11±0.00 0.040* ΣSFA 13.42±0.12 14.92±0.02 0.005* C16:1n-7 2.02±0.07 1.68±0.00 0.043* C18:1n-9 28.69±0.63 24.34±0.04 0.020* C20:1n-9 3.62±0.11 2.46±0.00 0.000* C22:1n-9 0.57±0.01 0.50±0.01 0.024* ΣMUFA 34.90±0.46 28.99±0.06 0.005* C18:2n-6 10.33±0.13 8.67±0.01 0.006* C18:3n-6 2.83±0.16 3.92±0.03 0.017* C20:2n-6 2.42±0.07 2.84±0.00 0.031* C20:3n-6 1.81±0.02 2.21±0.03 0.000* Σn-6PUFA 17.39±0.12 17.64±0.05 0.135 C20:3n-3 1.29±0.02 1.76±0.01 0.000* C20:5n-3 3.71±0.15 3.44±0.15 0.269 C22:5n-3 1.65±0.01 2.54±0.05 0.000* C22:6n-3 17.86±0.24 20.40±0.10 0.001* Σn-3PUFA 24.51±0.40 28.14±0.21 0.001* ΣPUFA 41.91±0.28 45.78±0.17 0.000* DHA/EPA 4.82±0.13 5.95±0.27 0.020* n-3/n-6 1.41±0.03 1.60±0.02 0.007* 注：SFA：饱和脂肪酸；MUFA：单不饱和脂肪酸；PUFA：多不饱和脂肪酸。 Note: SFA: Saturated fatty acid; MUFA: Monounsaturated fatty acid; PUFA: Polyunsaturated fatty acid.

表 2 亚东鲑黄色卵和橘红色卵的脂肪酸组成(%总脂肪酸) Tab.2 Fatty acid composition in yellow and orange eggs of Yadong trout (% total fatty acids)

图 1(Fig. 1)

图 2 亚东鲑黄色卵和橘红色卵脂肪酸种类比较(%总脂肪酸) Fig.2 Comparison of fatty acid composition in yellow and orange eggs of Yadong trout (% total fatty acids)

本研究共检测出18种氨基酸，其中，EAA有9种，NEAA有9种。在EAA中，亚东鲑黄色卵中缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、赖氨酸和组氨酸含量均显著低于橘红色卵(P<0.05)，而苏氨酸、异丙氨酸、苯丙氨酸和精氨酸较橘红色卵无显著差异(P>0.05)。在NEAA中，黄色卵中甘氨酸和丙氨酸显著低于橘红色卵(P<0.05)，其他氨基酸中2种卵无显著差异(P>0.05)。黄色卵中∑EAA、∑NEAA以及∑TAA较橘红色卵无显著差异(P>0.05)。

表 3(Tab.3)

表 3 亚东鲑黄色卵和橘红色卵的氨基酸组成(%干物质基础) Tab.3 Amino acid composition in yellow and orange eggs of Yadong trout (% dry matter basis) 氨基酸 Amino acid 黄色卵 Yellow eggs 橘红色卵 Orange eggs P值 P value 必需氨基酸EAA    苏氨酸Thr 3.74±0.05 3.84±0.05 0.227    缬氨酸Val 4.74±0.03 4.97±0.04 0.011*    蛋氨酸Met 2.02±0.03 2.15±0.03 0.048*    异丙氨酸Ile 4.06±0.05 4.22±0.04 0.063    亮氨酸Leu 6.30±0.07 6.53±0.02 0.033*    苯丙氨酸Phe 3.32±0.06 3.42±0.01 0.234    赖氨酸Lys 5.53±0.06 5.78±0.02 0.014*    组氨酸His 1.72±0.02 1.80±0.01 0.025*    精氨酸Arg 4.23±0.17 4.23±0.06 0.983 非必需氨基酸NEAA    牛磺酸Tau 0.02±0.00 0.03±0.01 0.281    天冬氨酸Asp 5.88±0.14 6.31±0.37 0.339    丝氨酸Ser 3.90±0.05 4.04±0.05 0.124    谷氨酸Glu 8.77±0.05 8.91±0.06 0.147    甘氨酸Gly 1.71±0.01 1.76±0.00 0.009*    丙氨酸Ala 5.44±0.04 5.66±0.02 0.007*    半胱氨酸Cys 1.14±0.04 1.08±0.01 0.332    酪氨酸Tyr 3.19±0.06 3.29±0.01 0.241    脯氨酸Pro 3.61±0.01 3.57±0.03 0.320    总必需氨基酸∑EAA 35.66±0.47 36.94±0.15 0.060    总非必需氨基酸∑NEAA 33.66±0.31 34.66±0.48 0.151    ∑EAA/∑NEAA 1.06±0.01 1.07±0.01 0.733    总氨基酸TAA 69.32±0.65 71.6±0.62 0.064

表 3 亚东鲑黄色卵和橘红色卵的氨基酸组成(%干物质基础) Tab.3 Amino acid composition in yellow and orange eggs of Yadong trout (% dry matter basis)

由图 3可知，亚东鲑黄色卵中的蛋白质羰基(0.28 nmol/mg prot)和丙二醛(0.33 nmol/mg prot)含量均高于橘红色卵(蛋白质羰基：0.23 nmol/mg prot，丙二醛：0.29 nmol/mg prot)。由于样本量限制，蛋白质羰基和丙二醛结果取2次检测的平均值，未做统计分析。

图 1(Fig. 1)

图 3 亚东鲑黄色卵和橘红色卵中蛋白质羰基和丙二醛的含量 Fig.3 Protein carbonyl and malondialdehyde in yellow and orange eggs of Yadong trout

由图 4可知，亚东鲑黄色卵中的α-维生素E (117 mg/kg)和虾青素(未检出)均低于橘红色卵(α-维生素E：123 mg/kg，虾青素：1.55 mg/kg)。由于样本量限制，α-维生素E和虾青素结果取2次检测的平均值，未做统计分析。

图 1(Fig. 1)

图 4 亚东鲑黄色卵和橘红色卵中α-维生素E和虾青素的含量(%鲜重) Fig.4 Alpha-vitamin E and astaxanthin concentration in yellow and orange eggs of Yadong trout (% wet weight) 黄色卵中虾青素含量低于最小检出值。 The content of astaxanthin in yellow eggs is lower than the minimum detection limit.

卵中储存的蛋白和脂肪在胚胎发育过程中能发挥重要的作用。尤其是脂肪，不仅是胚胎发育时期能量代谢的基础物质，也是构成生物膜的重要物质(Cruzado et al, 2011)。亚东鲑2种颜色卵的粗蛋白比虹鳟(Oncorhynchus mykiss) (25.4%, 桂萌等, 2017) (23.83%, Kowalska-Góralska et al, 2019)、俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti) (20.77%)以及西伯利亚鲟(Acipenser baerii)(20.38%, 高露姣等, 2012)卵中的蛋白都要高。这可能与养殖过程中普遍使用高蛋白配合饲料(50%左右)有关。亚东鲑2种颜色卵的粗脂肪含量比俄罗斯鲟(10.42%)、西伯利亚鲟(13.58%, 高露姣等, 2012)、金枪鱼(Katsuwonus pelamis) (7.10%, 王斌等, 2020)和大黄鱼(Larimichthys crocea) (10.45%, 郑婷婷等, 2020)卵中粗脂肪要低，而相较虹鳟(3.60%, 桂萌等, 2017) (4.58%, Kowalska-Góralska et al, 2019)要高。不同物种中卵的脂肪和蛋白差异会有很大变化。在一篇关于野生亚东鲑卵(Kowalska-Góralska et al, 2019)的报道中，发现其卵中的粗蛋白和粗脂肪比本文中的含量要低很多，其主要原因可能与亚东鲑所摄食配合饲料有关。野生亚东鲑摄食环境复杂，活动量大。而养殖亚东鲑在集约化养殖条件下，饲料营养水平高；因此，在卵中可能会沉积更多的蛋白和脂肪用于胚胎发育。从亚东鲑2种颜色卵的常规营养成分比较来看，黄色卵相较于橘红色卵，粗蛋白的含量较低，但粗脂肪含量更高。因为产黄色卵的亲鱼年龄普遍低于产橘红色卵的亲鱼，因此，本研究表明，蛋白含量需要更长的时间来实现累积，也表明蛋白含量在决定卵子质量方面的重要作用。但值得一提的是，亲鱼的产卵年龄对所产卵质量的影响在不同鱼种间有所不同。点斑蓝子鱼(Siganid broostock)(Gorospe et al, 2011)的年龄会显著影响产卵频率和幼体存活率，但在亲鱼繁殖力、受精率以及每次产卵产生的幼体数量方面没有显著差异。美洲平鲉(Sebastes melanops) (Berkeley et al, 2004)幼体内的三酰甘油(TAG)随着亲鱼年龄的增加而增加，高龄的雌鱼所产的后代质量高于低龄雌鱼所产后代。然而在珊瑚礁鱼(Plectropomus leopardus)(Carter et al, 2015)中，影响卵子质量是母体大小，而不是年龄。因此，在不同种类的鱼中，鱼的年龄对于产卵质量的影响也不同。

从亚东鲑2种颜色卵的脂肪酸组成整体来看，SFA中以C16:0 (棕榈酸)为主，MUFA中以C18:1n-9为主(油酸)，n-6高不饱和脂肪酸以C18:2n-6 (亚油酸) 为主，n-3高不饱和脂肪酸以C22:6n-3 (DHA)为主。这与其他鱼类卵中的脂肪酸组成基本一致。2种卵脂肪脂肪酸组成在存在较大差异，体现在黄色卵的SFA和PUFA含量相较于橘红色卵更少，而MUFA则更多。在PUFA中，特别是n-3PUFA中，橘红色卵中DHA含量比黄色卵中高很多，这也是2种卵中PUFA差异的主要因素。类似情况在虹鳟2种颜色的卵中也有发现(姜作发等, 2004)。虹鳟在人工养殖情况下所产橘红色卵DHA含量高于淡黄色卵。与本研究不同的是，虹鳟橘红色卵中EPA含量也高于淡黄色卵，而亚东鲑2种卵的EPA含量比较关系却刚好相反。DHA在鱼类众多生理过程如生长、视觉、神经、繁育、体色以及脂质代谢等方面中都发挥重要作用(Sargent et al, 1999; 徐后国, 2013)。在对繁育性能的影响方面，DHA可以提高受精卵的孵化率以及仔鱼的成活率(李远友等, 2004; Ling et al, 2006)。因此，DHA含量更高是橘红色卵质量优于黄色卵的重要原因之一。黄色卵中MUFA尤其是C18:1n-9含量高于橘红色卵，加之黄色卵脂肪含量高于橘红色卵，因此，黄色卵中高C18:1n-9含量可能造成了DHA的稀释。

亚东鲑2种颜色卵的氨基酸组分情况也存在较大差异。除了精氨酸、半胱氨酸和脯氨酸外，橘红色卵的其他氨基酸包括必需氨基酸和非必需氨基酸以及总氨基酸都比黄色卵在数值上高，尤其是蛋氨酸和赖氨酸等必需氨基酸含量均显著高于黄色卵。在养殖和野生的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)卵中也观察到类似情况(梁琍等, 2016)。蛋氨酸和赖氨酸均是鱼体的限制性氨基酸(罗兴等, 2022)，其在鱼体繁育过程中也发挥重要作用。在拉利毛足鲈(Colisa lalia)亲鱼饲料中不添加蛋氨酸和赖氨酸，其产卵率和受精孵化率降低，并且在蛋氨酸缺乏时，亲鱼出现无法产卵的情况(Shim et al, 1990)。在金头鲷(Sparus aurata)中，降低饲料中的赖氨酸含量后，卵黄中的蛋白质含量显著下降，仔鱼成活率降低，然而，在基础饲料中添加必需氨基酸后，仔鱼的成活率和生长速度都得到了提高(Harel et al, 1995)。因此，赖氨酸和蛋氨酸对受精卵的孵化率以及仔鱼的存活和生长会都具有明显的提高作用。其他必需氨基酸如缬氨酸、亮氨酸和组氨酸也在黄色卵中低于橘红色卵。基于此结果分析，蛋氨酸和赖氨酸等必需氨基酸含量较高同样是橘红色卵质量优于黄色卵的重要因素之一。

蛋白质羰基和丙二醛含量分别反映蛋白质和脂肪的过氧化程度(Uchida et al, 2003; Poli et al, 2010; 崔锡帅等, 2022)。黄色卵的蛋白质羰基和丙二醛的含量均高于橘红色卵。这表明，黄色卵的抗氧化能力显著低于橘红色卵。α-维生素E和虾青素的测定结果显示，橘红色卵中的α-维生素E和虾青素含量均高于黄色卵。α-维生素E作为4种生育酚中活性最强的一种，是一种强还原剂和抗氧化剂(肖登元等, 2015)，而虾青素是类胡萝卜素中的主要色素。在水产动物中，添加适量虾青素可以提高其生长成活率、繁育性能、抗应激能力、抗氧化性以及免疫力，并且在改善体色方面也有积极作用(Christiansen et al, 1996; Řehulka et al, 2000; Yi et al, 2014; Liu et al, 2016; Paibulkichakul et al, 2008; Page et al, 2006; 廖章斌, 2019)。虾青素含量可能是决定2种卵颜色差异的关键因素。在野生鳕鱼和养殖鳕鱼卵中发现，野生鳕鱼的卵中的总色素和虾青素含量要显著高于养殖鳕鱼的卵，且色素含量跟卵的受精率和孵化率呈正相关关系(Salze et al, 2010)。在甲壳动物中同样如此，在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)(Li et al, 2020)的两种卵中，紫色卵的虾青素比绿色卵更高。综上，从抗氧化物质含量来看，橘红色卵相较黄色卵具有更强的抗氧化能力，这同样是橘红色卵具有更好质量的决定因素之一。

综合来看，相较于黄色卵，橘红色卵具有更高的蛋白含量。在n-3PUFA方面，橘红色卵DHA含量明显高于黄色卵。在氨基酸组成方面，橘红色卵有着更高的赖氨酸、蛋氨酸和组氨酸等必需氨基酸含量。橘红色卵中蛋白质羰基和丙二醛含量低于黄色卵，且α-维生素E和虾青素的含量高于黄色卵，表明橘红色卵的抗氧化能力高于黄色卵。本实验结果表明，蛋白、必需氨基酸、DHA、抗氧化物质等的含量可能是决定橘红色卵质量优于黄色卵的重要因素，这为亲鱼培育过程中促繁育人工配合饲料的科学配制提供了参考。