TY - JOUR ID - 10.11758/yykxjz.20160325003 TI - 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ML01株胞外产物及分泌性蛋白的分离与特性分析 AU - 沈桂明 AU - 李 晨 AU - 史成银 AU - 贾 丹 AU - 范 超 AU - 谢国驷 AU - 付泉洁 VL - 38 IS - 4 PB - 中国水产科学研究院黄海水产研究所 SP - 25 EP - 33 PY - JF - 渔业科学进展 JA - UR - http://journal.yykxjz.cn/yykxjz/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20160325003&flag=1 KW - 哈维氏弧菌;胞外产物;分泌性蛋白;质谱分析;基因克隆 KW - Vibrio harveyi; Extracellular products (ECPs); Secretory proteins; Mass spectrometry analysis; Gene cloning AB - 本研究以引起珍珠龙胆石斑鱼[Epinephelus fuscoguttatus (♀) ´ Epinephelus lanceolatus (♂)] 幼鱼“皮肤溃疡病”的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi) ML01株为研究对象,采用平板膜覆盖技术和柱层析技术,分离、纯化了ML01株的胞外产物及分泌性蛋白。应用毒性试验、质谱分析与分子克隆技术,对纯化的胞外产物和3种主要的分泌性蛋白进行了特性分析与鉴定。结果显示,哈维氏弧菌ML01株的胞外产物(Extracellular products,ECPs)具有酯酶、明胶酶、淀粉酶、酪蛋白酶活性,无脲酶活性。ECPs对羊红细胞无溶血性,对斑马鱼(Danio rerio)的半数致死剂量(LD50)为19.55 μg/g鱼体重。从ML01株中分离到3种主要的分泌蛋白P42、P36、P31,其分子量分别为42、36、31 kDa。经质谱鉴定和分析,这3种蛋白分别为哈维氏弧菌的外膜蛋白OmpU和OmpN,以及一种功能未知的蛋白。利用同源克隆,成功地从ML01株基因组中扩增到了P42、P36、P31的基因。序列测定和比对结果显示,ML01株的这3个基因与哈维氏弧菌ATCC 33843(GenBank CP009467)的相应基因相比,其开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列的相似性分别为97.08%、100%、99.67%,其编码的多肽序列的相似性分别为99.71%、100%和99.93%。本研究对进一步分析哈维氏弧菌ML01株的致病机理、研发该菌的亚单位疫苗具有重要的参考价值。 ER -