《渔业科学进展》虚拟专辑——对虾疾病：对虾偷死野田村病毒(CMNV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)
对虾病毒性偷死病(Viral covert mortality disease, VCMD)是由偷死野田村病毒(Covert mortality nodavirus, CMNV)引起的一种新发疫病，近年来使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失。
传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是一种分布较广、危害较大的对虾病毒，已被世界动物卫生组织(OIE)列为须向其申报的甲壳类重要疫病病原。IHHNV在我国已形成了一定的流行趋势，目前仍是严重危害我国养殖虾类的重要病毒。
编辑部整理了近年来发表在本刊上的6篇关于对虾偷死野田村病毒(CMNV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的研究论文，组成本期虚拟专辑，欢迎阅读、引用。
2021, 42(5):77-85.
DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20200331001
摘要:
基于虾类行动障碍野田村病毒(movement disorder nodavirus, MDNV)的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因设计寡核苷酸引物和探针，以含有MDNV靶基因的pMD18-MDNV质粒和RNA标准品为模板，通过优化反应体系和反应程序，建立了MDNV的TaqMan RT-PCR检测方法。优化后的反应组分：20.0 μL TaqMan RT-PCR反应液预混液中包含11.0 μL一步法RT-PCR缓冲液、0.8 μL酶混合物、0.3 μmol/L正向引物、0.3 μmol/L反向引物、0.4 μmol/L探针、1.0 μL模板和5.2 μL RNA-free H2O；优化后的反应程序：54.5℃ 15 min，95℃ 1 min；45个热循环扩增(95℃ 10 s，60.3℃ 30 s)。本研究所建立的方法能实现对MDNV的特异性检测，在1.4×1010~1.4×101 copies/μL标准质粒浓度范围内，起始模板浓度对数值与反应循环数间呈良好的线性关系；该方法最低可检测5.5×101拷贝的RNA标准品或1.4×101拷贝的pMD18-MDNV标准质粒。分析结果还显示，该检测方法批内Ct值和批间Ct值的变异系数(CV)分别小于1.27%和1.83%，具有良好的重复性和稳定性。利用该方法对2019年采自我国部分省市的样品进行检测发现，凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中MDNV的阳性检出率为23.5% (16/68)。本研究建立的MDNV TaqMan RT-PCR方法具有特异性、快速和灵敏等特点，可为对虾养殖实践中MDNV的定性、定量检测与监测以及有效防控提供技术支持。
基于虾类行动障碍野田村病毒(movement disorder nodavirus, MDNV)的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因设计寡核苷酸引物和探针，以含有MDNV靶基因的pMD18-MDNV质粒和RNA标准品为模板，通过优化反应体系和反应程序，建立了MDNV的TaqMan RT-PCR检测方法。优化后的反应组分：20.0 μL TaqMan RT-PCR反应液预混液中包含11.0 μL一步法RT-PCR缓冲液、0.8 μL酶混合物、0.3 μmol/L正向引物、0.3 μmol/L反向引物、0.4 μmol/L探针、1.0 μL模板和5.2 μL RNA-free H2O；优化后的反应程序：54.5℃ 15 min，95℃ 1 min；45个热循环扩增(95℃ 10 s，60.3℃ 30 s)。本研究所建立的方法能实现对MDNV的特异性检测，在1.4×1010~1.4×101 copies/μL标准质粒浓度范围内，起始模板浓度对数值与反应循环数间呈良好的线性关系；该方法最低可检测5.5×101拷贝的RNA标准品或1.4×101拷贝的pMD18-MDNV标准质粒。分析结果还显示，该检测方法批内Ct值和批间Ct值的变异系数(CV)分别小于1.27%和1.83%，具有良好的重复性和稳定性。利用该方法对2019年采自我国部分省市的样品进行检测发现，凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中MDNV的阳性检出率为23.5% (16/68)。本研究建立的MDNV TaqMan RT-PCR方法具有特异性、快速和灵敏等特点，可为对虾养殖实践中MDNV的定性、定量检测与监测以及有效防控提供技术支持。
2019, 40(2):25-32.
DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180420006
摘要:
对虾病毒性偷死病(Viral covert mortality disease, VCMD)是由偷死野田村病毒(Covert mortality nodavirus, CMNV)引起的一种新发疫病，近年来使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失。为筛查对虾池塘养殖系统中CMNV的自然宿主种类，本研究在山东潍坊一个发生VCMD的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖场排水渠中采集了野生鲫鱼(Carassius auratus)样品，对其携带和感染CMNV的情况进行了系统分析。逆转录套式PCR检测结果显示，鲫鱼样品的总RNA能扩增出与预期大小一致的CMNV RNA依赖的RNA聚合酶目标基因片段。组织病理和原位杂交分析显示，鲫鱼脑部神经组织空泡化严重，脑皮层锥体细胞和二叠体颗粒细胞核固缩明显，心肌呈现典型的溶解样坏死病理变化，脑和心肌组织的病变部位均可见淡紫色CMNV探针杂交信号。透射电子显微镜观测显示，鲫鱼脑中可见神经组织空泡化，心肌组织坏死严重，CMNV样病毒颗粒占据了心肌细胞内大部分区域。本研究表明，CMNV在自然条件下能够跨越物种障碍、感染对虾养殖池塘排水渠中的野生鲫鱼，并导致靶组织明显的病理损伤，同时也提示，CMNV感染其他鱼类尤其是淡水鱼类的风险值得高度关注。
对虾病毒性偷死病(Viral covert mortality disease, VCMD)是由偷死野田村病毒(Covert mortality nodavirus, CMNV)引起的一种新发疫病，近年来使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失。为筛查对虾池塘养殖系统中CMNV的自然宿主种类，本研究在山东潍坊一个发生VCMD的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖场排水渠中采集了野生鲫鱼(Carassius auratus)样品，对其携带和感染CMNV的情况进行了系统分析。逆转录套式PCR检测结果显示，鲫鱼样品的总RNA能扩增出与预期大小一致的CMNV RNA依赖的RNA聚合酶目标基因片段。组织病理和原位杂交分析显示，鲫鱼脑部神经组织空泡化严重，脑皮层锥体细胞和二叠体颗粒细胞核固缩明显，心肌呈现典型的溶解样坏死病理变化，脑和心肌组织的病变部位均可见淡紫色CMNV探针杂交信号。透射电子显微镜观测显示，鲫鱼脑中可见神经组织空泡化，心肌组织坏死严重，CMNV样病毒颗粒占据了心肌细胞内大部分区域。本研究表明，CMNV在自然条件下能够跨越物种障碍、感染对虾养殖池塘排水渠中的野生鲫鱼，并导致靶组织明显的病理损伤，同时也提示，CMNV感染其他鱼类尤其是淡水鱼类的风险值得高度关注。
2019, 40(2):65-73.
DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180420003
摘要:
偷死野田村病毒(CMNV)引起的病毒性偷死病(VCMD)使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失，为查明CMNV及其变异株的分子流行病学特征，本研究采用逆转录套式PCR (RT-nPCR)、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)和TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR) 3种方法，对2016~2017年中国沿海省市CMNV及一种新型野田村病毒——行动障碍野田村病毒(MDNV)的流行、分布和变异情况进行了分析。结果显示，养殖凡纳滨对虾、中国明对虾、日本囊对虾、斑节对虾和罗氏沼虾等种类中均可检测到CMNV阳性；在河北、山东、浙江、福建、广东和海南等省市采集的患病对虾中均存在CMNV。基于RT-nPCR、RT-LAMP和TaqMan RT-qPCR的检测结果显示，2016和2017年样品中CMNV的阳性检出率依次分别为11.8%和7.8%，6.7%和3.9%，17.7%和12.4%；基于上述3种方法检测结果计算得出，2016和2017年样品中CMNV的阳性检出率分别为26.8%和16.3%；基于RT-LAMP的分析显示，2016年样品中MDNV的阳性检出率为9.4%。本研究表明，中国沿海省市养殖虾类中VCMD的流行和危害仍不容忽视，RNA依赖的RNA聚合酶基因不断变异导致前期基于该基因开发的CMNV检测方法可靠性下降，检出假阴性风险升高；同时，发病对虾中出现了新的野田村病毒株系且具有较高的流行率，其传播危害风险值得高度关注。
偷死野田村病毒(CMNV)引起的病毒性偷死病(VCMD)使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失，为查明CMNV及其变异株的分子流行病学特征，本研究采用逆转录套式PCR (RT-nPCR)、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)和TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR) 3种方法，对2016~2017年中国沿海省市CMNV及一种新型野田村病毒——行动障碍野田村病毒(MDNV)的流行、分布和变异情况进行了分析。结果显示，养殖凡纳滨对虾、中国明对虾、日本囊对虾、斑节对虾和罗氏沼虾等种类中均可检测到CMNV阳性；在河北、山东、浙江、福建、广东和海南等省市采集的患病对虾中均存在CMNV。基于RT-nPCR、RT-LAMP和TaqMan RT-qPCR的检测结果显示，2016和2017年样品中CMNV的阳性检出率依次分别为11.8%和7.8%，6.7%和3.9%，17.7%和12.4%；基于上述3种方法检测结果计算得出，2016和2017年样品中CMNV的阳性检出率分别为26.8%和16.3%；基于RT-LAMP的分析显示，2016年样品中MDNV的阳性检出率为9.4%。本研究表明，中国沿海省市养殖虾类中VCMD的流行和危害仍不容忽视，RNA依赖的RNA聚合酶基因不断变异导致前期基于该基因开发的CMNV检测方法可靠性下降，检出假阴性风险升高；同时，发病对虾中出现了新的野田村病毒株系且具有较高的流行率，其传播危害风险值得高度关注。
2018, 39(3):167-172.
摘要:
传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是一种分布较广、危害较大的对虾病毒，已被世界动物卫生组织(OIE)列为须向其申报的甲壳类重要疫病病原。IHHNV在我国已形成了一定的流行趋势，目前仍是严重危害我国养殖虾类的重要病毒。本文从IHHNV的流行地区及危害、宿主、致病类型、对宿主不同年龄阶段的致病性差异、与白斑综合征病毒(WSSV)的干扰作用、感染机制和致病机理方面，综述了与IHHNV致病性相关的研究进展，以期为进一步深入研究IHHNV防控提供参考资料。
传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是一种分布较广、危害较大的对虾病毒，已被世界动物卫生组织(OIE)列为须向其申报的甲壳类重要疫病病原。IHHNV在我国已形成了一定的流行趋势，目前仍是严重危害我国养殖虾类的重要病毒。本文从IHHNV的流行地区及危害、宿主、致病类型、对宿主不同年龄阶段的致病性差异、与白斑综合征病毒(WSSV)的干扰作用、感染机制和致病机理方面，综述了与IHHNV致病性相关的研究进展，以期为进一步深入研究IHHNV防控提供参考资料。
2017, 38(2):158-166.
DOI: 10.11758/yykxjz.20160123001
摘要:
2013年，河北、天津等地区养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育苗期出现死苗、出苗率低的情况，生产上，仔虾个体大小差异较大，造成了严重损失。本研究采用荧光定量PCR方法(Real-time PCR)对天津大港地区采集的108尾凡纳滨对虾仔虾样品进行单尾病原检测。结果显示，传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, IHHNV)和虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)均有检出。IHHNV阳性检出率100%，每微克对虾组织DNA的病毒拷贝数为103–107，且个体较大的样品(1.2–2.0 cm)携带病毒拷贝数偏高；EHP阳性检出率为49.1%，每微克对虾组织DNA的拷贝数为103–105，且集中于个体较小样品(0.7–1.1 cm)。对IHHNV和EHP阳性凡纳滨对虾样品进行生物学体长与病毒载量指数相关性分析，显示IHHNV载量指数与对虾生长速率呈正相关，虾组织IHHNV平均载量达8.51×104 copies/μg DNA，为较高的感染水平；EHP的载量与对虾生长速率呈负相关关系，与较大个体阳性检出率较低相对应，虾组织EHP平均载量达到2.19×104 copies/μg DNA，为较高的感染水平。由此，该批凡纳滨对虾仔虾患病为IHHNV和EHP的混合感染所致，本研究数据为IHHNV和EHP病原混合感染流行情况及其对养殖育苗期仔虾生长的影响提供科学依据。
2013年，河北、天津等地区养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育苗期出现死苗、出苗率低的情况，生产上，仔虾个体大小差异较大，造成了严重损失。本研究采用荧光定量PCR方法(Real-time PCR)对天津大港地区采集的108尾凡纳滨对虾仔虾样品进行单尾病原检测。结果显示，传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, IHHNV)和虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)均有检出。IHHNV阳性检出率100%，每微克对虾组织DNA的病毒拷贝数为103–107，且个体较大的样品(1.2–2.0 cm)携带病毒拷贝数偏高；EHP阳性检出率为49.1%，每微克对虾组织DNA的拷贝数为103–105，且集中于个体较小样品(0.7–1.1 cm)。对IHHNV和EHP阳性凡纳滨对虾样品进行生物学体长与病毒载量指数相关性分析，显示IHHNV载量指数与对虾生长速率呈正相关，虾组织IHHNV平均载量达8.51×104 copies/μg DNA，为较高的感染水平；EHP的载量与对虾生长速率呈负相关关系，与较大个体阳性检出率较低相对应，虾组织EHP平均载量达到2.19×104 copies/μg DNA，为较高的感染水平。由此，该批凡纳滨对虾仔虾患病为IHHNV和EHP的混合感染所致，本研究数据为IHHNV和EHP病原混合感染流行情况及其对养殖育苗期仔虾生长的影响提供科学依据。
2015, 36(1):67-73.
DOI: 10.11758/yykxjz.20150110
摘要:
利用世界动物卫生组织(OIE)推荐的4对引物(389F/R、392F/R、77012F/77353R和309F/R)，通过普通PCR方法，对本实验室2011−2012年采集于国内不同地区的对虾样品进行IHHNV(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus)检测，并对国内存在的IHHNV检出类型进行初步分析。检测结果显示，在凡纳滨对虾、斑节对虾、中国对虾、宽沟对虾中均检测出了IHHNV，而在脊尾白对虾中未检出。其中凡纳滨对虾阳性率最高，中国对虾阳性检测率最低。对虾样品2011年阳性率高于2012年，华东地区高于华北、华南两地。此外，根据4对引物的检测结果，得到国内IHHNV的4种PCR检出类型。
利用世界动物卫生组织(OIE)推荐的4对引物(389F/R、392F/R、77012F/77353R和309F/R)，通过普通PCR方法，对本实验室2011−2012年采集于国内不同地区的对虾样品进行IHHNV(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus)检测，并对国内存在的IHHNV检出类型进行初步分析。检测结果显示，在凡纳滨对虾、斑节对虾、中国对虾、宽沟对虾中均检测出了IHHNV，而在脊尾白对虾中未检出。其中凡纳滨对虾阳性率最高，中国对虾阳性检测率最低。对虾样品2011年阳性率高于2012年，华东地区高于华北、华南两地。此外，根据4对引物的检测结果，得到国内IHHNV的4种PCR检出类型。
