银鲳(Pampus argenteus)属硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)、鲳科(Stromateidae)、鲳属(Pampus)，是近海暖水性鱼类，在我国渤海、黄海、东海和南海等海区皆有分布(尹飞等, 2011; 徐善良等, 2012; 秦玉等, 2013¹⁾)。银鲳俗称镜鱼、平鱼或车片鱼，鱼体呈卵圆形，体形侧扁，体背面与体腹面狭窄，体长为体高的1.4–1.6倍，头长为吻长的3.8–4.8倍；4鼻孔，口小，上下颌具细小牙一行；体被银白色的细小圆鳞，易脱落，头部除两颌及吻部外全部被鳞；背鳍隆起呈镰刀状，臀鳍与背鳍对称且同形(图 1)。银鲳繁殖期在每年的5–6月，受精卵为浮性球形卵。银鲳具有生长快、个体大、肉质细嫩鲜美等特点，且有较高的经济价值与营养价值(赵峰等, 2009)，是我国重要的海洋经济鱼类，但由于过度捕捞和生存环境受到破坏，其资源量正在逐年下降(李建生等, 2014)。目前，国内外对银鲳的研究主要集中在分类、资源评估、胚胎发育、繁殖习性和环境胁迫等(刘静等, 2002; 赵峰等, 2011; 施兆鸿等, 2016; Almatar et al, 2004)，有关染色体方面的研究还未见报道，仅有淡水白鲳(Colossoma brachypomum)和卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)(白俊杰等, 1988; 舒琥等, 2007)的染色体核型分析的相关报道。银鲳作为新开发的工厂化养殖品种，研究其染色体核型对银鲳的遗传、变异、分类、系统演化和育种等都有重要意义。本研究以银鲳鳃组织为材料，观察银鲳的染色体及其核型，以期为银鲳遗传育种的研究提供理论基础。

1) Qin Y. Development of palymorphic mierosatellites for Pampus argenteus and its analysis on population genetic structure. Master´s Thesis of Zhejiang Ocean University, 2013 [秦玉.银鲳微卫星标记开发及群体遗传结构分析.浙江海洋学院硕士研究生学位论文, 2013]

图 1(Fig. 1)

图 1 银鲳 Figure 1 Pampus argenteus

实验于2016年7月在山东青岛金沙滩水产开发有限公司进行，所用银鲳为70–80日龄，体长范围为7–9 cm。

染色体标本的制备参照半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)鱼苗染色体标本制备方法(周丽青等, 2005)，略作修改，将银鲳置于秋水仙素终浓度为0.005%的海水中暂养4 h，设置3个平行组，每组10尾银鲳。

每组取3尾银鲳，剪取鳃组织，置于10 ml KCl溶液(0.0375 mol/L)中，低渗1 h，再将鳃组织转移至现配制预冷的卡诺氏(Carnoy)液(甲醇:冰醋酸=3:1)中，每隔30 min更换1次固定液，重复3次。固定鳃组织4℃保存过夜，次日将固定的鳃组织用50%冰醋酸解离约10 min，用滴管吹打加速解离，挑去未解离的鳃组织，吸取解离液采用热滴片法制备染色体标本。每尾鱼制备4张滴片，用10% Giemsa染色40 min，自来水冲洗，晾干并用100倍油镜镜检。

染色体核型分析参考波纹唇鱼(Cheilihus uhdulatus)的染色体分析方法(周丽青等, 2010)，略作修改。从制备的滴片中选取轮廓清晰的染色体中期分裂相进行染色体计数(周丽青等, 2005)，再从中选取染色体收缩适中且分散最清晰的10个中期分裂相进行显微拍照，经放大打印后，描绘染色体轮廓进行核型分析，并计算相对长度和臂比。

相对长度=(实测染色体长度/全部染色体长度总和)×100；

臂比=长臂长度/短臂长度；

求出它们的平均值和标准差，按Levan等(1964)确定的标准进行染色体分类，得出银鲳的染色体核型公式。

实验结果显示，通过热滴法制备的9尾银鲳的染色体标本，均观测到了染色体中期分裂相(图 2-a)，未见有异形性染色体，统计清晰分裂相120个，并对银鲳二倍体中期分裂相进行染色体计数，结果列于表 1。由表 1可见，染色体数为2n=48占71.6%，确定染色体众数为48。

图 1(Fig. 1)

图 2 银鲳中期分裂相染色体及核型 Figure 2 The metaphase chromosome and karyotype of P. argenteus a.具有同型染色体银鲳的中期分裂相染色体；b.具有同型染色体银鲳的染色体核型 a. The mataphase chromosomes of P. argenteus with homotypic sex chromosomes; b. The karyotype of P. argenteus with homotypic sex chromosome

表 1(Tab. 1)

表 1 银鲳二倍体染色体计数 Table 1 Counts of the diploid chromosome in P. argenteus 项目 Items 染色体数目 Number of chromosome ≤47 47 48 49 ≥49 总和 Sum 分裂项数目 Number of metaphase 12 6 86 8 8 120 所占百分比 Percentage of metaphase (%) 10.0 5.0 71.6 6.7 -6.7 100

表 1 银鲳二倍体染色体计数 Table 1 Counts of the diploid chromosome in P. argenteus

银鲳染色体相对长度和臂比值统计结果见表 2。银鲳所有染色体都为同型染色体(图 2-b)。根据Levan等(1964)方法进行染色体分类，1号染色体臂比值在1.67–2.90范围内，属亚中部着丝粒染色体；2–6号染色体臂比值在3.0–7.0范围内，属亚端部着丝粒染色体；7–24号染色体臂比值 > 7.0。因此，确认银鲳染色体核型为2n=2SM+10ST+36T，并且部分染色体带有随体。

表 2(Tab. 2)

表 2 银鲳中期分裂相染色体相对长度和臂比值(平均值±标准差) Table 2 The relative length and arm ratio of metaphase chromosome in P. argenteus (Mean±SD) 染色体序号 Number of chromosome 相对长度 Relative length 臂比值 Arm ratio 染色体类型 Chromosome type 1 2.86±0.07 2.21±0.03 SM 2 2.70±0.09 5.20±0.04 ST 3 2.84±0.10 4.41±0.02 ST 4 2.00±0.04 3.62±0.09 ST 5 1.88±0.05 5.10±0.06 ST 6 1.87±0.06 5.10±0.13 ST 7 1.70±0.32 ∞ T 8 1.60±0.21 ∞ T 9 1.24±0.11 ∞ T 10 1.00±0.12 ∞ T 11 1.10±0.15 ∞ T 12 1.11±0.16 ∞ T 13 1.84±0.09 ∞ T 14 1.86±0.06 ∞ T 15 1.74±0.04 ∞ T 16 1.64±0.13 ∞ T 17 1.66±0.09 ∞ T 18 1.60±0.05 ∞ T 19 1.46±0.07 ∞ T 20 1.44±0.03 ∞ T 21 1.30±0.02 ∞ T 22 1.20±0.06 ∞ T 23 0.94±0.13 ∞ T 24 0.72±0.02 ∞ T

表 2 银鲳中期分裂相染色体相对长度和臂比值(平均值±标准差) Table 2 The relative length and arm ratio of metaphase chromosome in P. argenteus (Mean±SD)

已知的海水鱼类染色体核型研究中，常见的染色体制备方法有外周血淋巴细胞培养、血细胞培养、鳞片培养、鳍条再生组织培养、肾细胞培养和胚胎培养等(马纲, 1996; 杨效文等, 2000)，多以细胞分裂增生能力较强的器官组织为实验样本制备标本。最常用的方法是注射植物血凝素(PHA)体内培养肾细胞制片法(林义浩, 1982; 舒琥等, 2010)，而银鲳的体表细小鳞片容易脱落，且对外界敏感且反抗激烈，当对其捞取进行实验操作时，容易受惊吓后剧烈游动、擦伤等导致体被细小鳞片脱落或体表受伤死亡。因此，向体内注射PHA或秋水仙素等离水实验操作均会对银鲳造成较大物理伤害，导致银鲳活力低下甚至过早死亡，不利于制备和获得中期分裂相。因此，常用的染色体制备方法不适用于银鲳。本研究首先让银鲳在含0.005%浓度秋水仙素的海水中游泳4 h，然后直接活体取鳃组织样本，该方法避免了对银鲳离水实验操作造成的物理伤害，确保银鲳在活力正常的前提下获得实验样本。另外，鳃作为鱼的呼吸器官，与水体直接接触，相比鳍、头肾等其他器官，鳃组织内的血液与水体的交换率更高，可以更好地发挥秋水仙素的作用，因此，本研究通过改良秋水仙素处理方式和取材方法，获得大量染色体形态好且分散好的银鲳中期分裂相。

研究鱼类染色体的多样性，对生物进化、变异与遗传都有重要的参考价值，而且对鱼类的分类、进化和不同鱼种的相关性也有重要意义，可为鱼类遗传育种提供细胞遗传学依据(Poltev, 2008)，也为鱼类工厂化养殖的种质标准评定提供参考。目前，已有核型报道的海洋鱼类中，2n=48的核型数目占72%，鲈形目占大多数(朱香萍等, 2007; 赵金良, 2000)，如七带石斑鱼(Epihephelus septemfasciatus) 2n=48(钟声平等, 2010)、卵形鲳2n=48(舒琥等, 2007)和波纹唇鱼2n=48等(周丽青等, 2010)。本研究结果显示，银鲳染色体数目2n=48，这与鲈形目大多数鱼类染色体数目一致。染色体形态观察确定银鲳染色体核型没有异型染色体，由于研究对象为70–80日龄稚鱼，性腺外观分辨不出雌雄，体表也看不出性征，因此，尚不能确定银鲳是否存在异形性染色体，有待性成熟之后再验证，猜测也有可能银鲳的性别分化仍属于基因水平，尚未达到染色体水平。核型分析结果为2n=2SM+ 10ST+36T，其中，1对为亚中部着丝粒染色体，5对为亚端部着丝粒染色体，18对为端部着丝粒染色体。在不同标本的中期分裂相中，同时存在亚中部、亚端部和端部着丝粒染色体，染色体核型较一般鱼类更为复杂。同时，在染色体臂比值分析中，同一种染色体在不同中期分裂相中，染色体的形态差异较大，在一些分裂相中，染色体长臂相对细长，而在另一些分裂相中，染色体长臂相对粗短，推测是秋水仙素作用力度不同导致的，秋水仙素作用力度大的，染色体臂粗短，染色深；反之，染色体臂细长，染色浅。

Gosline(1971)将真骨鱼类划分为低位类、中位类和高位类3个演化类群，并在此基础上，日本学者小岛吉雄(1979)认为，越处于上位类群，染色体数目变异范围分布越收敛，端部着丝点染色体越多，臂数越少。由银鲳染色体组型可知，其臂数NF=50，符合典型的高位类群鱼类核型特征。从进化角度讲，臂数的变化是从低位类群到高位类群表现为逐渐升高的趋势(李康等, 1984)，即中部或亚中部着丝点染色体的增加代表着进化的趋势，由此可以说明，银鲳染色体核型是相对进化类型。其具体的进化程度有待进一步研究。