盐度是影响水生动物繁殖、生长、发育和存活等的重要环境因子，一直是水产养殖学和逆境生物学研究的热点(申玉春等, 2012; 付萍等, 2017; 李娜等, 2018)。在不同盐度环境条件下养殖的水产品，其肉质和口感存在明显差异(王士稳等, 2006; 梁萌青等, 2009; 戴习林等, 2012)，以高盐水体养殖产品品质最佳。中国沿海或西北地区存在大量的高盐水体，山东沿海盐度为30~70的养殖池塘面积约有13.3万hm²，如何有效开发利用这些高盐水域，是关乎当地民生的重要问题。高盐对虾的养殖是有效途径之一。高盐对虾的养殖和推广，可以解决高盐水体目前存在的诸如闲置、养殖物种匮乏、资源利用率低、经济效益差等问题，对于改善当地人民的养殖结构，促进创业就业，提高经济效益和生活水平具有重要意义。

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)又称南美白对虾，属广盐性虾类，耐受盐度为0.5~78(陈永乐等, 2003)，具有生长速度快、抗病力强、适高密度养殖等特点，是中国目前养殖规模和产量最大的对虾品种。凡纳滨对虾的生活史主要包括受精卵、胚胎发育、无节幼体、溞状幼体、糠虾、仔虾、幼虾和成虾8个阶段。各发育阶段对盐度的要求不同，仔虾期是对虾生活史中最佳的盐度调节时期，可实现盐度驯化，以便于苗种的投放，一般称此操作为“标粗”。根据最终驯化盐度的不同又分为“淡化标粗”和“盐化标粗”(李春玲等, 2009)。近年来，随着国内外对虾价格走高和新品种、新技术的推广应用，对虾养殖不再局限于传统的海水养殖，淡水养殖和高盐水域养殖逐步成为对虾养殖产量提升、特色品牌打造的重点。当前，在高盐水域凡纳滨对虾苗种的投放和养殖过程中，普遍存在苗种体质较弱、成活率较低等问题。如何提高高盐水体苗种的成活率和保障其活力成为高产的关键，因此，确立最佳的盐化幅度、盐化速度和盐化方式是亟待解决的问题。目前，国内外对凡纳滨对虾仔虾的淡化标粗和淡水养殖研究较多(唐建洲等, 2016; 边绍新等, 2014; 郝登春等, 2018)。然而，关于盐化标粗的研究较少，对其仔虾高盐驯化的梯度、速度和时间的相关研究尚未见报道。

本研究以凡纳滨对虾仔虾为研究对象，通过设置不同的盐化梯度、盐化速度和盐化方式，分析仔虾的生长性能、活力和存活率，探讨高盐苗种盐化标粗的最适盐化幅度、盐化速度和盐化方式，旨在丰富凡纳滨对虾高盐逆境生物学研究，为盐化标粗生产实践提供理论支持。

于2017年4~6月在滨州市北海新区海缘养殖科技有限公司和青岛农业大学海洋科学与工程学院开放实验室进行仔虾盐化实验，实验用凡纳滨对虾仔虾取自公司的育苗车间，选用规格整齐、健康活泼、不携带病原菌的同批次同家系P4期个体。体长为(0.515±0.022) cm，体重为(1.3±0.3) mg。实验用海水经过滤、杀菌、曝气处理，高盐海水由海水晶溶解于普通海水再经过滤调配获得，使用前曝气处理1 d。实验温度维持在(31.0±0.5)℃，pH为8.0~8.5，光照周期为14L︰10D，连续充氧，溶解氧保持在5 mg/L以上。高盐驯化全程投喂大卤虫(Artemia salina)和仔虾专用配合饲料(粗蛋白46%，粗脂肪10.6%，粗纤维1.8%，粗灰分13%，赖氨酸2.3%，水分5%)，每天投喂5次(07:00、11:00、15:00、19:00、23:00)，大卤虫交替投喂，全程饱食投喂(投喂配合饵料每次3.2~5.0 g/m³，每尾仔虾投喂大卤虫5~30只/d，具体投喂量根据幼体实际摄食情况和存活率及时调整)，投喂结束1 h后，清除残饵和粪便。每3 d换水1次，换水量为总量的1/3。

实验在100 L白色塑料桶中进行，设置3/d、6/d、9/d、12/d和15/d 5个盐化梯度，每个梯度设3个平行，共15个处理，每个处理放养规格整齐的P4期仔虾1000尾。整个盐化过程需由盐度30提升至60，历时13 d，盐化速度为6 h/次。整个盐化过程采取间隔盐化方式，其中，3/d处理的盐度变化为30→33→36→39→42→46→49→51→54→57→60；6/d处理的盐度变化为30→36→42→48→54→60；9/d处理的盐度变化为30→39→48→57→60；12/d处理的盐度变化为30→36→48→60；15/d处理的盐度变化为30→45→60。

实验在35 cm×25 cm× 20 cm白色塑料箱中进行，设置1、3、6、12、18 h/次5个盐化速度梯度，每个梯度设3个平行，共15个处理，每个处理放养规格整齐的P4期仔虾200尾。通过向原水体中加注等量高盐海水的方法，养殖水体盐度由30提升至60，注水速度变化通过调节换水阀门流量完成。整个盐化标粗时间为13 d，盐化幅度为6/d，整个盐化过程采取间隔盐化方式。

实验在35 cm×25 cm×20 cm白色塑料箱中进行，养殖水体盐度由30提升至60，历时15 d。将15 d苗种标粗时间均分为3个阶段，每阶段5 d，分别标注为前期(第1~5天)、中期(第6~ 10天)、后期(第11~15天)。实验将盐化时间分别集中于仔虾标粗的3个阶段中，进行连续5 d的盐化操作，分别标注为前期盐化方式、中期盐化方式、后期盐化方式。此外设置间隔盐化方式，即分别于2、5、8、11和14 d时盐化1次，直至水体盐度提升至60。每次盐化幅度为6/d，盐化速度为12 h/次。每种盐化方式均设3个平行，共15个处理，每个处理放养规格整齐的P4期仔虾200尾。

健康苗种应满足大小均匀整齐、体色透明、体表干净、肢体完整，对外界刺激反应灵敏，肠胃充实饱满等条件。而在仔虾活力判定方面，主要通过以下2种方法进行判别。

方法1：取50尾仔虾，放入盛有育苗池水的白色塑料盆中，用手顺时针或逆时针转动盆内水体，使水体形成漩涡，使仔虾苗集中于盆中央，待水流稍缓时，能够迅速散开并逆水游动的仔虾为活力强的健康苗种；能够迅速散开，仅少部分仔虾逆水游动为活力较强的仔虾；待漩涡水流速度趋向于静止时，仔虾才从漩涡中挣脱出来，此类仔虾活力可定为活力较弱。

方法2：取100尾仔虾，放置于湿毛巾中小心包裹，静置10 min，放回原观察杯中，存活率 > 80%，可判定为优质健康、活力强的苗种；存活率为30%~ 80%，为活力较强的苗种；苗种死亡率较高，存活率 < 30%，则判定为活力较弱苗种。

所有实验均于开始前测定每组15尾仔虾的体长和体重，实验结束后，再次测定每组仔虾的体长和体重，计算盐化标粗的存活率，并对照仔虾活力评定标准，测定苗种活力状况。

实验数据用平均值±标准差(Mean±SD)表示，利用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析(One-way ANOVA)以及Duncan多重比较检验数据差异的显著性，以P < 0.05为差异显著。

从表 1可以看出，随着盐化幅度的增加，仔虾的体重增加量呈先增加后降低的趋势，盐化幅度为9/d时，增重量达到最高值。盐化幅度为6/d和9/d两处理间增重量差异不显著(P > 0.05)；盐化幅度为15/d时，仔虾增重量最低，生长速度最慢，与其他各处理间均差异显著(P < 0.05)；盐化幅度为3/d时，仔虾生长速度较慢，与盐化幅度为6/d处理间差异显著(P < 0.05)，但与盐化幅度为12/d处理间差异不显著(P > 0.05)，盐化幅度为6/d处理的增重量比3/d时提高了8.52%。

表 1(Tab.1)

表 1 盐化幅度对凡纳滨对虾仔虾增重量和活力的影响 Tab.1 Effects of salinity domestication gradient on the weight gain and activity of L. vannamei post larvae 项目Items 盐化幅度Salinity domestication gradient 3/d 6/d 9/d 12/d 15/d 增重量Weight gain (mg) 17.6±0.2b 19.1±0.6c 19.4±0.4c 17.2±0.7b 15.2±0.4a 仔虾活力Postlarvae activity 强Strong 强Strong 较强Medium 弱Weak 弱Weak 注：不同处理组间标注相同字母代表差异不显著(P > 0.05)，不同字母代表差异显著(P < 0.05)。下同 Note: Values in different groups with the same letters showed no significant differences (P > 0.05), different letters indicated significant different (P < 0.05). The same as below

表 1 盐化幅度对凡纳滨对虾仔虾增重量和活力的影响 Tab.1 Effects of salinity domestication gradient on the weight gain and activity of L. vannamei post larvae

此外，由图 1可知，随着盐化幅度的升高，仔虾存活率也表现出先升高后下降的趋势。从最终存活率来看，盐化幅度为6/d处理组最高，达78.8%。盐化幅度为3/d和6/d处理间存活率差异不显著(P > 0.05)。盐化幅度 > 6/d时，存活率呈降低趋势，盐化幅度为6/d和9/d处理间存活率差异不显著(P > 0.05)，但盐化幅度为6/d和12/d处理间差异显著(P < 0.05)。

图 1(Fig. 1)

图 1 盐化幅度对凡纳滨对虾仔虾存活率的影响 Fig.1 Effects of salinity domestication gradient on the survival rate of L. vannamei post larvae 不同字母代表差异显著(P < 0.05)。下同 Different letters indicated significant different (P < 0.05). The same as below

在苗种活力方面，盐化幅度为3/d和6/d时，仔虾活力强，但盐化幅度为3/d处理的仔虾幼体因每天都需要进行盐度驯化，应激表现明显，部分个体摄食较差，出现红体症状；盐化幅度为6/d时，仔虾表现良好。随着盐化幅度的升高，仔虾活力明显下降。盐化幅度为9/d时，首次盐化后，仔虾个体活力强，之后活力迅速减弱；盐化幅度为12/d和15/d处理组，与9/d处理组变化趋势相似，首次盐度调整后，仔虾表现出对高盐环境和盐度变化具有良好的适应力，当盐度 > 50时，仔虾活力明显下降，死亡率逐步升高。

如表 2所示，不同盐化速度对凡纳滨对虾仔虾的增重率影响显著，随着盐化速度的升高，仔虾体重增加表现出先升高后维持稳定的趋势。盐化速度对仔虾生长速度影响显著，盐化速度为1 h/次和3 h/次与其他处理间均差异显著(P < 0.05)。其中，盐化速度为1 h/次对仔虾生长影响最为显著，且与其他处理间的增重率差异均显著(P < 0.05)，在此盐化速度下，仔虾增重量为16.7 mg，日均增重量为1.28 mg。盐化速度为3 h/次和6 h/次处理间仔虾的生长速度差异显著(P < 0.05)。盐化速度 > 6 h/次时，盐化速度对仔虾生长速度无显著影响(P > 0.05)，日增重量为1.48~1.51 mg。

表 2(Tab.2)

表 2 盐化速度对凡纳滨对虾仔虾增重量和活力的影响 Tab.2 Effects of salinity domestication speed on the weight gain and activity of L. vannamei postlarvae 项目Items 盐化速度Salinity domestication speed (h/次) 1 3 6 12 18 增重量Weight gain (mg) 16.7±0.4a 18.2±0.7b 19.4±0.5c 19.3±0.2c 19.6±0.9c 仔虾活力Postlarvae activity 较强Medium 较强Medium 强Strong 强Strong 强Strong

表 2 盐化速度对凡纳滨对虾仔虾增重量和活力的影响 Tab.2 Effects of salinity domestication speed on the weight gain and activity of L. vannamei postlarvae

在最终存活率方面，盐化速度为12 h/次处理的成活率最高，达到81.7%，1 h/次处理的成活率最低，为51.8%。各盐化速度下，仔虾存活率呈先升高后降低的趋势，成活率由高到低依次为12 h/次 > 18 h/次 > 6 h/次 > 3 h/次 > 1 h/次(图 2)。

图 1(Fig. 1)

图 2 盐化速度对凡纳滨对虾仔虾存活率的影响 Fig.2 Effects of salinity domestication speed on the survival rate of L. vannamei postlarvae

在仔虾活力方面，盐化速度越快，仔虾应激表现越明显，摄食量下降，出现红体、空肠空胃等症状。盐化后期，仔虾因活力降低，死亡率逐步升高。盐化速度 > 6 h/次，仔虾应激表现有所缓解，2次盐化间隔期应急反应缓解，活力正常。

从表 3可以看出，盐化方式对仔虾生长有显著影响。前期盐化(第1~5天)中的仔虾生长速度显著慢于中期盐化(第6~10天)、后期盐化(第11~15天)和间隔盐化(P < 0.05)。相较于其他几种盐化方式，前期盐化会在实验前期较短的时间内完成仔虾的整个盐化过程，在剩余的实验时间内，仔虾将长时间处于较高的高盐胁迫状态，需要更多的能量来进行自身渗透压调节，生长速度缓慢；而对于中期盐化方式，仔虾在标粗前期未进行盐度调整，仔虾发育较快，完成盐化操作后，仔虾体重的增长量较前期盐化显著提高(P < 0.05)，体重增加了33.07%；对于后期盐化方式，仔虾体重在前期、中期得到迅速的增长，在增重量方面要高于前期盐化和中期盐化2种方式；间隔盐化，仔虾的生长速度与后期驯化相似，两处理间的增重量差异不显著(P > 0.05)。

表 3(Tab.3)

表 3 盐化方式对凡纳滨对虾仔虾增重量和活力的影响 Tab.3 Effects of salinity domestication mode on the weight gain and activity of L. vannamei postlarvae 项目Items 盐化方式Salinity domestication mode 前期盐化 Early salinization 中期盐化 Medium-term salinization 后期盐化 Later salinization 间隔盐化 Interval salinization 增重量Weight gain (mg) 12.7±1.2a 16.9±0.5b 19.9±0.7c 20.5±0.3c 仔虾活力Postlarvae activity 弱Weak 较强Medium 较强Medium 强Strong

表 3 盐化方式对凡纳滨对虾仔虾增重量和活力的影响 Tab.3 Effects of salinity domestication mode on the weight gain and activity of L. vannamei postlarvae

在存活率方面，随着盐化时间的后延，仔虾存活率升高。在前期或中期进行盐化，由于仔虾个体较小，对盐度突变的耐受能力较差，生长发育较慢，存活率显著低于后期盐化和间隔盐化(P < 0.05)；通过后期盐化和间隔盐化，仔虾存活率分别达到70.5%和77.0%，是前期盐化方式下仔虾存活率的的2.04倍和2.23倍。

在仔虾活力方面，受盐化和仔虾发育阶段的影响，仔虾活力表现为间隔盐化 > 后期盐化 > 中期盐化 > 前期盐化。仔虾盐化时间与仔虾活力和仔虾的存活率存在正相关关系，随着盐化时间的延后或间隔，仔虾活力逐步增强，存活率也逐步升高。为达到较高的驯化盐度和较好的仔虾活力，可采取间隔盐化方式。

图 1(Fig. 1)

图 3 盐化方式对凡纳滨对虾仔虾存活率的影响 Fig.3 Effects of salinity domestication mode on the survival rate of L. vannamei postlarvae

盐度是影响对虾生长、存活的重要因素。仔虾阶段是凡纳滨对虾盐度调整的最佳时期，通常由P3~P5期仔虾，经过13~15 d完成盐度驯化和短期苗种标粗操作，使之适应不同养殖环境，增加苗种放养后的成活率。本研究结果显示，从生长速度来看，凡纳滨对虾仔虾最适盐化幅度为6/d和9/d；从存活率来看，最适盐化幅度为3/d和6/d；综合考虑生长速度和存活率两方面因素，仔虾最适盐化幅度为6/d。盐化幅度 > 6/d时，随着盐化幅度的升高，仔虾存活率显著下降。Saoud等(2003)认为，外界环境发生改变，处于非等渗环境时，仔虾会根据环境盐度做出应激反应。对虾也会依靠机体调控血淋巴渗透压来实现调节过程，以维持虾体内环境的稳定。作者认为，当盐化幅度过高时，可能由于仔虾机体调控血淋巴渗透压能力有限，加之摄食不足导致的机体能量的不足，会加剧肝胰脏和免疫系统的负担，随着养殖时间的延长，仔虾生长速度减慢、死亡率升高。

由于生产需要和天气变化等原因，盐度突变普遍存在于整个对虾养殖周期。在适宜的突变盐度范围内，对虾可通过调节自身渗透压和提升免疫机能来适应。王良臣等(1991)认为，虾苗对盐度突变适应范围小，对渐变适应范围较宽。廖永岩等(2004)通过对凡纳滨对虾仔虾淡化幅度和速度的研究发现，淡化速度快慢不仅影响凡纳滨对虾仔虾的生长性能和抗病力，也影响仔虾的存活率，较快的盐化速度限制仔虾的生长，死亡率显著升高。李俊峰(2009)认为，淡化速度过快的虾苗体质均较弱，养成过程中容易感染疾病，并在一定程度上影响生长速度。本研究表明，盐化速度显著影响仔虾的生长发育，较快的驯化速度显著降低了仔虾活力，导致死亡率升高。这与廖永岩等(2004)对仔虾淡化的研究结果相似。因此，仔虾高盐驯化不能急于求成，应循序渐进，严格控制驯化速度是仔虾驯化标粗成功的关键，盐化时间间隔超过6 h更加有利于仔虾的盐化。臧维玲等(2003)研究也获得了相似的结果，认为适于规模化生产的淡化速度为6 h/次。

凡纳滨对虾的等渗点在盐度25左右(陈垂坤等, 2015)，当盐度超过或低于等渗点时，对虾会主动调节渗透压(李英等, 2010; Chen et al, 1996)。外界盐度与等渗点的差值越大，对虾通过补偿机制来补偿调节渗透压的能耗就越多(吴立峰等, 2011; 钱佳慧等, 2015)，长时间的高盐胁迫会显著抑制对虾的生长速度，使死亡率升高。Bray等(1994)研究认为，凡纳滨对虾幼体最适生长盐度为25，在低盐度环境条件下对虾生长较快，而在高盐度水体中其生长则会受抑制。通过研究盐化标粗生产过程中仔虾在不同盐化方式下的生长和存活情况，发现仔虾在生长速度和存活率方面，前期盐化和中期盐化均显著低于后期盐化和间隔盐化，产生此结果的原因可能在于前期盐化或中期盐化时，因仔虾个体较小，对高盐突变的适应能力弱；此外，前期盐化也会延长仔虾在较高盐度下的胁迫时间，进而导致存活率、生长性能和活力下降；而在间隔盐化方式中，仔虾通过一定的时间间隔不断地调节自身生理机能，以适应外界盐度的提高。由此可见，仔虾盐化标粗过程中适宜的时间间隔有助于提高盐化效果。