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三疣梭子蟹微卫星多重PCR技术建立及条件的优化
任宪云1,2, 刘萍1, 李健1, 李晓萍1, 韩智科1,2, 刘磊1
1.国水产科学研究院黄海水产研究所;2.上海海洋大学水产与生命学院
摘要:
选择三疣梭子蟹22个多态性高的微卫星标记,经过引物间的搭配、组合测试以及反应条件的优化(退火温度、Mg2 +含量、dNTPs的浓度等参数),构建了多重PCR扩增技术体系。本研究最终建立了47个二重PCR组合,并在47个二重引物的组合基础上建立15个三重PCR组合,3个四重PCR组合。该多重PCR技术体系的建立为三疣梭子蟹品种选育、种系评估提供快速、有效分子检测技术。
关键词:  三疣梭子蟹  SSR  多重PCR体系
DOI:
分类号:
基金项目:国家高技术研究发展计划项目(2006AA10A406)、国家自然科学基金(30871933)、农业科技成果转化资金项目(2010GB23260589)共同资助
Establishment and optimization of a microsatellite-labeling multiplex PCR system in Portunus trituberculatus
Abstract:
By selecting 22 pairs of polymorphic microsatellite markers of Portunus trituberculatus, primers matching, and combinatorial testing, the multiplex PCR amplification system was built and the reaction conditions were optimized, including annealing temperature, Mg2+ concentration, dNTPs concentration and other parameters. Forty-seven combinations of double PCR, 15 combinations of triple PCR, and 3 quadruple PCR combinations were established. The establishment of this technology will provide a fast, effective molecular detecting tool for the P. trituberculatus breeding and germ-line assessment.
Key words:  Portunus trituberculatus  SSR  Multiplex PCR system